靜脈移植人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞在陳爾茨海默病小鼠的體內(nèi)遷移及治療機制研究.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimer's disease AD)，俗稱老年性癡呆(senile dementia)，是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性退行性變性疾病。發(fā)現(xiàn)至今，研究者一直沒有停止對阿爾茨海默病的病因和發(fā)病機理的研究，但對于這一疾病的治療至今還沒有突破性的進(jìn)展。隨著細(xì)胞工程的迅速發(fā)展，干細(xì)胞移植治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究為治療AD開辟了新天地。
　　 人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞(aminiotic membrane derived hu

2、man mesenchymal stemcells，Ad-hMSCs)是近些年分離培養(yǎng)的多潛能干細(xì)胞。本實驗深入探索靜脈移植人第三代羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞在阿爾茨海默氏癥轉(zhuǎn)基因鼠體內(nèi)的遷移存活，以及在腦部的歸巢和疾病治療的機制。
　　 本論文共分為三部分。第一部分：人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)；第二部分：第三代人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞靜脈移植在轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默癥小鼠體內(nèi)的遷移及存活；第三部分：第三代人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞靜脈移植在轉(zhuǎn)基因阿爾

3、茨海默癥小鼠腦部的歸巢以及疾病治療機制研究。
　　 第一部分：從胎盤分離出人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞，體外培養(yǎng)擴增，傳至第三代，選擇形態(tài)保持良好，生長旺盛的細(xì)胞做后續(xù)實驗。
　　 第二部分：采用原代培養(yǎng)后傳至第三代的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病小鼠的尾靜脈移植，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106個/ml，注射量0.5ml/只。采用組織冰凍切片，熒光顯微鏡觀察人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞移植后，不同時間點在轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默癥小鼠體內(nèi)心臟、

4、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟及腦部的遷移情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)移植第三代的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞后，在不同的時間的小鼠的肝臟、脾臟、肺臟及腦組織都可以發(fā)現(xiàn)歸巢的細(xì)胞存活；而任何時間在小鼠的心臟以及腎臟均未能檢測到歸巢細(xì)胞。并且所有實驗小鼠生長良好，無明顯的體重降低，及其他豎毛、抓狂、癲癇等不良反應(yīng)。
　　 第三部分：第三代人羊膜干細(xì)胞靜脈移植APP轉(zhuǎn)基因鼠模型后31d，通過免疫組化技術(shù)，對第三代的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞在轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病小鼠的腦組織

5、中的分化功能進(jìn)行研究，探討可能的疾病治療機制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)小鼠腦組織中星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)明顯增多，神經(jīng)干細(xì)胞、神經(jīng)祖細(xì)胞以及神經(jīng)元細(xì)胞也明顯增加，并且沒有致瘤現(xiàn)象，小鼠肝腎功能正常。表明人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞尾靜脈移植對治療轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病小鼠有積極的治療效果，安全可行。
　　 本研究首次采用人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞以靜脈途徑移植觀察第三代人羊膜干細(xì)胞在阿爾茨海默氏癥轉(zhuǎn)基因鼠模型體內(nèi)不同時間點的遷移情況，并研究人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞移植31d后，