Wnt-β-catenin通路激動劑-LiCl對3T3-L1脂肪細(xì)胞chemerin表達(dá)的影響.pdf

1、肥胖,如今越來越影響人類的健康,已經(jīng)成為世界范圍內(nèi)影響人類生活質(zhì)量的疾病之一.患有肥胖癥的人,多數(shù)伴有多種并發(fā)癥,如糖尿病、動脈粥樣硬化、心血管疾病等,引起人們的重視.所以,研究肥胖的發(fā)病機(jī)制,尋找治療肥胖的切入點(diǎn),成為如今科研領(lǐng)域乃至醫(yī)療領(lǐng)域亟待解決的問題.
　　脂肪細(xì)胞的分化對于脂肪的積累過程無疑起到了促進(jìn)作用,針對脂肪細(xì)胞分化的研究也漸趨成為研究肥胖發(fā)生的熱點(diǎn)之一.在體外,用藥物將3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)成脂肪細(xì)胞,模擬體

2、內(nèi)脂肪細(xì)胞分化的過程,該模型的建立為眾多研究肥胖發(fā)生的研究者提供了良好的平臺.
　　如今,針對3T3-L1的分化機(jī)制,很多關(guān)鍵基因及重要因子的作用已逐漸明朗化.比如,過氧化物酶體增殖物激活受γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ，PPARγ)和CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白(C/EBP:CCAAT/enhancerbinding protein alpha，C/EBP)二者已被認(rèn)為是

3、控制脂肪細(xì)胞分化的關(guān)鍵因子.近年來,Wnt/β-catenin信號通路在脂肪細(xì)胞的分化中的抑制作用也被眾多研究所證實(shí).而chemerin作為新近發(fā)現(xiàn)的脂肪因子,其在脂肪細(xì)胞分化中的表達(dá)變化已成為人們近來關(guān)注的焦點(diǎn).對于脂肪細(xì)胞的分化,越來越多的研究已經(jīng)從單基因、多基因甚至是多因子相互作用傾向于信號通路之間的對話的探索,而Wnt/β-catenin信號通路與chemerin及其受體之間是否也存在一定的關(guān)系,目前尚未有任何報(bào)道.
　　

4、本論文就這兩方面展開研究,通過LiCl激動Wnt/β-catenin信號通路的表達(dá),在3T3-L1脂肪細(xì)胞的分化過程中,利用RT-PCR技術(shù)檢測了chemerin的表達(dá)變化,以及LiCl的梯度濃度干預(yù)實(shí)驗(yàn).結(jié)果顯示:
　　1)利用激素“雞尾酒”法誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞,經(jīng)油紅O染色觀察其誘導(dǎo)率已達(dá)85％～90％,成功地建立了脂肪分化模型,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ).
　　2)LiCl干預(yù)濃度的摸索實(shí)驗(yàn),其中10mM的濃度還不能

5、夠完全抑制細(xì)胞的分化;而20mM的濃度較好的抑制了脂肪細(xì)胞的分化,完全激活了Wnt/β-catenin信號通路的表達(dá),故后續(xù)實(shí)驗(yàn)采用20mM LiCl.
　　3)利用20mM LiCl在3T3-L1細(xì)胞分化過程中孵育,油紅O結(jié)果顯示:非干預(yù)組著色脂滴于Day3開始出現(xiàn),隨著分化進(jìn)程越來越多,至Day14時(shí)達(dá)到最大值.而干預(yù)組著色脂滴只在Day14時(shí)稍有一點(diǎn).
　　4)利用20mM LiCl在3T3-L1細(xì)胞分化過程中孵育,R

6、T-PCR結(jié)果顯示:非干預(yù)組chemerin的RNA水平在Day0至Day1時(shí)下調(diào),其后隨著分化進(jìn)程逐漸上調(diào),而干預(yù)組chemerin雖也呈現(xiàn)相似的趨勢,但其表達(dá)在很大程度上被抑制.
　　5)在3T3-L1細(xì)胞分化成熟之后,LiCl梯度濃度干預(yù)24小時(shí),分別設(shè)置了0、100uM、1mM、5mM、10mM、20mM六個(gè)梯度濃度,結(jié)果顯示:即使在成熟脂肪細(xì)胞中,LiCl仍舊可對chemerin的RNA表達(dá)有所抑制,并且抑制效應(yīng)隨LiC

7、l濃度的增大趨于明顯.但效果明顯不如前期干預(yù).
　　以上結(jié)果表示,LiCl干預(yù)對于chemerin的表達(dá)存在一定的抑制作用,這種抑制作用表現(xiàn)在兩方面:一是在3T3-L1細(xì)胞分化過程中添加LiCl,對chemerin具有顯著抑制作用;二是在3T3-L1細(xì)胞分化成熟時(shí)LiCl孵育24小時(shí),對chemerin的抑制效果存在但不是很明顯.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,Wnt/β-catenin信號通路可能對chemerin的表達(dá)存在直接的或者間接的作用