2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、作為一種細胞內(nèi)寄生的機會致病性原蟲,在免疫功能正常的宿主體內(nèi),弓形蟲速殖子增殖受到抑制即轉(zhuǎn)換為緩殖子,形成以包囊形式存在的慢性期感染。包囊可數(shù)年甚至終生存在眼和腦內(nèi),引起相應(yīng)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和不同程度的視力損害。緩殖子在宿主免疫功能下降或缺陷時,可重新活化增殖轉(zhuǎn)變?yōu)樗僦匙?,造成嚴重的臨床癥狀和后果,如包囊內(nèi)緩殖子的激活是艾滋病患者發(fā)病和死亡的一個重要原因。因此,預(yù)防或控制由包囊內(nèi)緩殖子引起的慢性感染有著極其重要的意義。
  目前

2、,弓形蟲疫苗保護性抗原的研究大多數(shù)針對引起急性感染的速殖子期特異性表達抗原,對引起慢性感染的緩殖子期特異性表達抗原的研究則相對較少。SAG2C/2D/2X足剛地弓形蟲SAG2超家族的表面抗原,特異性表達在緩殖子時期,免疫熒光分析表明,SAG2C和/或SAG2D在速殖子-緩殖子轉(zhuǎn)換前即表達。研究發(fā)現(xiàn),SAG2C/2D/2X在包囊長時間存在腦組織的機制中起到重要作用。然而,至今還未有對SAG2C/2D/2X作為抗弓形蟲病疫苗的潛力進行評估和

3、檢測的研究。因此,以緩殖子期特異性抗原SAG2C/2D/2X為靶抗原的弓形蟲核酸疫苗的研究對預(yù)防和控制弓形蟲慢性感染是非常重要的。
  在本研究中,我們選擇弓形蟲緩殖子抗原SAG2C/2D/2X構(gòu)建核酸疫苗,并評估其誘導(dǎo)小鼠的免疫應(yīng)答和抗弓形蟲包囊形成的保護能力。首先,體外擴增緩殖子抗原SAG2C/2D/2X基因,將其克隆入真核表達質(zhì)粒pVAX1構(gòu)建pVAX1-SAG2C(pSAG2C),pVAX1-SAG2D(pSAG2D)和p

4、VAX1-SAG2X(pSAG2X)核酸疫苗,然后將核酸疫苗經(jīng)肌肉注射免疫BALB/c小鼠。結(jié)果表明,與對照組PBS和空載體pVAX1組相比,核酸疫苗免疫組小鼠可產(chǎn)生高滴度的抗弓形蟲抗體IgG(d35,p<0.05),特別是pSAG2C,pSAG2X及混合免疫組,IgG抗體滴度在末次免疫后4周增加明顯,差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01)。ELISA法檢測小鼠脾細胞培養(yǎng)上清細胞因子IL-2的水平在單基因核酸疫苗免疫組較對照組有顯著增加

5、(p<0.05),混合免疫組中檢測到最高量(486.3±79.1)pg/ml,與單基因組相比差異顯著(p<0.01);流式細胞術(shù)分析免疫鼠CD8+T淋巴細胞產(chǎn)IFN-γ的水平,單基因核酸免疫組產(chǎn)IFN-γ的CD8+T淋巴細胞表達較對照組顯著增高(p<0.05),混合疫苗免疫組可檢測到最高比例的IFN-γ+/CD8+T雙染陽性的脾細胞,且具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01)。淋巴細胞增殖反應(yīng)也顯示,與對照組相比,單基因與混合基因免疫組小鼠的脾細

6、胞具有更高的細胞增殖活性(p<0.05)。以上實驗數(shù)據(jù)表明,單基因及混合基因疫苗誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生主要以Th1型為主的細胞免疫反應(yīng)。
  我們用Ⅱ型弓形蟲PRU株包囊進行攻擊實驗,評估SAG2C/2D/2X核酸疫苗的免疫保護作用。結(jié)果顯示,核酸疫苗免疫組小鼠腦包囊形成數(shù)量顯著減少,與PBS組相比其減少率分別為72%,23%和70%,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。特別是pSAG2C/pSAG2D/pSAG2X混合免疫組,包囊減少率達

7、77%,免疫保護性優(yōu)于單基因免疫組(p<0.01)。
  我們進一步分析了蛋白SAG2C,SAG2D,SAG2X的結(jié)構(gòu)特性。氨基酸序列比對分數(shù)為98%,高度預(yù)示SAG2C/2D/2X為同源蛋白;在空間上,發(fā)現(xiàn)蛋白SAG2C/2D/2X的結(jié)構(gòu)域由多個β片層環(huán)繞而成,預(yù)測該結(jié)構(gòu)特點可能與蛋白功能相關(guān)。MHC(即H-2)限制性的CD8+T細胞表位肽免疫小鼠可有效刺激小鼠產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)及免疫保護作用。特別是表位肽TSTTKSVTF和QA

8、LVPNSSL能高效刺激小鼠記憶性T淋巴細胞增殖,可作為表位疫苗和靶向藥物的候選成分。
  綜上所述,本課題通過對編碼弓形蟲緩殖子期特異性表達抗原SAG2C/2D/2X核酸疫苗及優(yōu)勢表位免疫BALB/c小鼠的實驗研究證實,緩殖子抗原SAG2C/2D/2X核酸疫苗可有效誘導(dǎo)免疫鼠產(chǎn)生體液及細胞免疫反應(yīng),可有效抵抗弓形蟲包囊的攻擊,腦內(nèi)包囊形成數(shù)量顯著減少,且三種抗原基因混合免疫的效果要優(yōu)于單基因免疫。另外,篩選出的抗原優(yōu)勢表位免疫小

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