RBM5基因過表達(dá)抑制A549細(xì)胞增殖及其對DHX15表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的:通過建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染RBM5基因的A549細(xì)胞系，觀察RBM5基因過表達(dá)對A549細(xì)胞增殖以及DHX15表達(dá)的影響，為肺癌基因治療提供理論依據(jù)。
　　方法:
　?、賾?yīng)用PCR技術(shù)從人睪丸cDNA中分兩段擴(kuò)增RBM5基因的開放閱讀框(ORF)，將RBM5基因克隆至真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)中;
　?、趯y序驗(yàn)證后的重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)/RBM5轉(zhuǎn)染肺腺癌細(xì)胞A549，經(jīng)G418篩選出RBM5基因過表達(dá)

2、陽性細(xì)胞株并采用Western Blot檢測對陽性細(xì)胞進(jìn)行鑒定，流式細(xì)胞法檢測RBM5基因過表達(dá)對肺腺癌細(xì)胞A549細(xì)胞周期的影響;
　　③運(yùn)用RT-PCR技術(shù)檢測RBM5基因過表達(dá)A549細(xì)胞株中剪接相關(guān)因子DHX15的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　?、俪晒?gòu)建出pcDNA3.1(+)/RBM5真核表達(dá)載體，建立了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染RBM5基因的A549細(xì)胞系并篩選出RBM5基因過表達(dá)陽性細(xì)胞株;
　?、谥亟M質(zhì)粒pcDNA3