一株野生雙孢蘑菇的鑒定、形成子實體的條件和機理研究.pdf

1、中國地大物博，擁有豐富的野生食用菌資源。野生食用菌味道鮮美，營養(yǎng)豐富，深受人們的喜愛。分離和馴化蘑菇野生種質(zhì)資源，擴(kuò)大蘑菇種質(zhì)資源是發(fā)展我國食用菌產(chǎn)業(yè)亟需解決的問題。本實驗室在山西省太原市小店區(qū)分離到一株野生蘑菇 G1。本課題計劃從該菌株的鑒定入手，研究其生物學(xué)特性，對該野生蘑菇進(jìn)行馴化栽培試驗，探索G1菌株在麥粒煮汁瓊脂培養(yǎng)基上形成子實體所需要的環(huán)境與條件，探索其形成子實體的機理。主要研究結(jié)果如下：
　　1.對野生蘑菇G1菌株進(jìn)

2、行了初步鑒定。以野生蘑菇G1菌株的DNA為模版，用通用引物ITS1和ITS4進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序分析，將所得到的rDNA ITS序列上傳到GenBank核酸序列數(shù)據(jù)庫，獲得GenBank序列登錄號為KT781515。對G1菌株的ITS序列與蘑菇屬的20個模式菌株的ITS序列一起構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，發(fā)現(xiàn)G1菌株在蘑菇屬內(nèi)與雙孢蘑菇和大肥菇的親緣度最高。然后使用掃描電鏡對G1菌株的擔(dān)孢子進(jìn)行了觀察，結(jié)合G1菌株的形態(tài)學(xué)特征從多個

3、方面進(jìn)行分析，將野生蘑菇G1菌株鑒定為雙孢蘑菇(Agaricus bisporus)。
　　2.對雙孢蘑菇G1菌株進(jìn)行了生物學(xué)特性及其馴化栽培研究。結(jié)果表明G1菌株的最適母種培養(yǎng)基為馬糞培養(yǎng)基。在馬糞培養(yǎng)基上，G1菌絲體長勢好，生長速度快（達(dá)到2.36mm/天），且沒有氣生菌絲。碳源試驗結(jié)果表明最適合 G1菌株菌絲體生長的碳源為麥芽糖。氮源試驗結(jié)果表明G1菌株可以很好的利用有機氮，雖然也可以利用銨態(tài)氮，但是生長效果一般，對硝態(tài)氮的

4、利用最差。溫度試驗結(jié)果表明G1菌株在15－35℃都能生長，25℃下無論菌絲體生長速度和長勢都比其他溫度要好。G1菌株在pH值為6－7時生長最快，且長勢很好，說明G1菌株喜歡在中性偏酸性的環(huán)境生長。利用經(jīng)過堆制發(fā)酵的糞草栽培料，按照傳統(tǒng)的雙孢蘑菇覆土栽培方法，成功得到了 G1菌株的子實體。G1菌株子實體營養(yǎng)成分分析結(jié)果表明該菌株的營養(yǎng)成分普遍高于雙孢蘑菇As2796菌株，具有更高的經(jīng)濟(jì)價值和潛在的藥用價值，是一株值得更深入研究的菌株。

5、r>　　3.在麥粒煮汁瓊脂培養(yǎng)基上研究了G1菌株形成子實體的條件。G1菌株菌絲體雖然可以在pH5.0－10.0生長，但只能在pH6.0－8.0形成原基和子實體，并且在pH6.0形成子實體的時間最短。G1菌株在光照、黑暗和12h/12h光暗交替下菌絲體都可以生長且生長速度差異不大，但是只有在黑暗的情況下可以形成原基和子實體。G1菌株可以在15－30℃形成原基和子實體，在15℃下從原基發(fā)育到子實體所需要的時間比20－25℃下更長。通過單因素

6、試驗和響應(yīng)面法對麥粒煮汁瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果表明當(dāng)在麥粒煮汁瓊脂培養(yǎng)基中添加17.7g/L麥芽糖和2.0g/L蛋白胨時， G1菌株的子實體形成所需時間為14天，與未優(yōu)化的麥粒煮汁瓊脂培養(yǎng)基相比，子實體形成所需時間縮短了16天。
　　4.為了闡明G1菌株在瓊脂培養(yǎng)基上形成子實體的機理，采用頂空固相微萃取對麥粒煮汁瓊脂培養(yǎng)基上G1菌株在不同時期所產(chǎn)生的易揮發(fā)性氣體和雙孢蘑菇As2796菌株所產(chǎn)生的揮發(fā)性氣體進(jìn)行了分離及結(jié)構(gòu)鑒定。