福建地區(qū)水痘—帶狀皰疹病毒臨床分離株基因型分析.pdf

1、目的:從福建地區(qū)水痘和帶狀皰疹患者中分離水痘-帶狀皰疹病毒（VZV），鑒別其野毒株或疫苗株屬性，并分析野毒株的基因型。
　　方法:1、將病人的水皰液直接接種于單層人胚肺纖維母細(xì)胞系MRC-5細(xì)胞，傳代1~3次。待病毒感染細(xì)胞出現(xiàn)特征性細(xì)胞病變（CPE）后，制備細(xì)胞懸液涂片并以VZV即刻早期蛋白62（IE62）單克隆抗體做免疫組化染色以鑒定VZV臨床分離株。
　　2、提取VZV基因組DNA，以高保真PCR擴(kuò)增ORF21、ORF

2、22和ORF62基因片段。分別以限制性?xún)?nèi)切酶Sma、BssH Ⅱ和NaeⅠ酶切ORF62的PCR產(chǎn)物，并與VZV野毒株（pOka）和疫苗株（vOka）ORF62 PCR產(chǎn)物的酶切圖譜比較以鑒別VZV臨床分離株為野毒株或疫苗株。
　　3、將ORF21和ORF22的PCR產(chǎn)物測(cè)序后與日本參考株vOka以及基因庫(kù)中Dumas、11.8、DR、CA123等參考株比對(duì)以確定福建地區(qū)VZV野毒株的基因型。
　　結(jié)果:
　　1、從6

3、9例水痘和帶狀皰疹病人中成功分離44株VZV臨床分離株，分離陽(yáng)性率63.8％。
　　2、44株VZV臨床分離株ORF62的PCR產(chǎn)物均不被Sma、BssH Ⅱ或NaeⅠ酶切，酶切圖譜為Sma-BssH Ⅱ-NaeⅠ-，與野毒株pOka一致。
　　3、44株VZV臨床分離株ORF21中33725和33728，ORF22中37902、38055、38081和38177等6個(gè)單核苷酸多態(tài)性（SNPs）位點(diǎn)的堿基序列與日本參考株vO