凝血因子Ⅷ室間調(diào)查品的研制.pdf

1、目的：
　　為了評(píng)價(jià)各醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室對(duì)于凝血因子Ⅷ（簡(jiǎn)寫(xiě)：FⅧ）項(xiàng)目的檢測(cè)能力，以及實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)量評(píng)估的需要，我們研制了多種濃度水平的FⅧ室間調(diào)查品。
　　方法：
　　1.FⅧ調(diào)查品的制備：選用不同來(lái)源、FⅧ含量各異的新鮮冰凍血漿，或者采用化學(xué)吸附法，調(diào)整血漿中FⅧ的濃度。用正交試驗(yàn)確定加入凍干保護(hù)劑的最佳比例，并依據(jù)凍干分析軟件監(jiān)控并優(yōu)化凍干工藝，制備多種濃度的FⅧ室間調(diào)查品。
　　2． FⅧ調(diào)查品的評(píng)價(jià)：
　

2、?。?）參照《中國(guó)生物制品檢定規(guī)程》中的相關(guān)要求，對(duì)自制調(diào)查品的外觀性狀、分裝精度、含水量、復(fù)溶性、同質(zhì)性和適用性等性能指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　?。?）參照中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)《能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南》（CNAS-GL03）對(duì)自制調(diào)查品的均勻性和穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　?。?）依據(jù)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）EP25《evaluation of stability of In Vitro Diagnostic R

3、eagents》中的加速試驗(yàn)方法預(yù)估自制調(diào)查品的有效期。
　　3. FⅧ調(diào)查品的應(yīng)用：采用自制調(diào)查品進(jìn)行3次室間調(diào)查，評(píng)價(jià)自制調(diào)查品的實(shí)際應(yīng)用性以及各實(shí)驗(yàn)室FⅧ項(xiàng)目的檢測(cè)能力。由于中國(guó)絕大多數(shù)的凝血因子檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室采用凝固法測(cè)定其活性，以％（活性）表示凝血因子所含的量（1%大致相當(dāng)于0.01個(gè)國(guó)際單位IU/mL），因此文中凝血因子的含量（即凝血因子的濃度）以%表示。
　　結(jié)果：
　　1.制備：
　?。?）經(jīng)濃度調(diào)整

4、可以得到FⅧ范圍在5%至110%的備用血漿。
　?。?）根據(jù)正交試驗(yàn)得到凍干保護(hù)劑的最佳配比：海藻糖（1.5% w/v）甘氨酸（0.5%w/v）4-羥乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）（0.2% w/v）。
　?。?）凍干工藝優(yōu)化流程為：1小時(shí)內(nèi)將樣本溫度降至-40℃；預(yù)凍5小時(shí)后啟動(dòng)主干燥（真空度為0.4mPa）；隔板升溫至-20℃；解析干燥（真空度為極限真空）隔板升至0℃；總干燥過(guò)程為48小時(shí)。
　　2.評(píng)價(jià)：
　

5、?。?）自制調(diào)查品的無(wú)菌實(shí)驗(yàn)，外觀性狀、復(fù)溶性、同質(zhì)性、適用性、分裝精度（最佳CV%為0.57）和含水量（1.29%至2.87%）均符合《中國(guó)生物制品檢定規(guī)程》的要求。
　?。?）均勻性評(píng)價(jià)：采用單因素方差分析比較自制調(diào)查品瓶?jī)?nèi)和瓶間的差異，各批調(diào)查品的實(shí)際統(tǒng)計(jì)量F值為0.064至2.13，均小于界值3.02（F（9,10）），說(shuō)明在α=0.05水平時(shí)，自制調(diào)查品中的FⅧ含量均勻。穩(wěn)定性評(píng)價(jià)：采用兩組獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)比較自制調(diào)查品

6、間隔30天的FⅧ濃度的差異，統(tǒng)計(jì)量p值為0.053至0.87，p值均>0.05，說(shuō)明在α=0.05，t0.05(10)=2.228，間隔30天自制調(diào)查品無(wú)顯著差異，自制調(diào)查品中FⅧ的含量穩(wěn)定。
　?。?）有效期預(yù)估：抽取兩批調(diào)查品（FⅧ濃度接近商品化質(zhì)控品），用加速試驗(yàn)Arrhenius方程式進(jìn)行有效期推斷，自制調(diào)查品在4℃的的有效期分別為197天和106天。
　　3.應(yīng)用：采用WHO凝血因子室間質(zhì)評(píng)統(tǒng)計(jì)方式，以等級(jí)制評(píng)價(jià)各

7、實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果（分ABCDE五個(gè)等級(jí)，A級(jí)最優(yōu)）。第一、二次室間調(diào)查的范圍是上海市6家開(kāi)展凝血因子項(xiàng)目檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室，所發(fā)放的自制FⅧ調(diào)查品濃度水平分別為7.1%、50.3%和78.5%；103.6%、48.9%和36.0%。并同時(shí)發(fā)放商品化質(zhì)控品對(duì)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力進(jìn)行評(píng)價(jià)，兩者評(píng)價(jià)結(jié)果一致，兩次調(diào)查均有一家實(shí)驗(yàn)室超出A級(jí)。參加第三次調(diào)查的實(shí)驗(yàn)室為18家，涵蓋中國(guó)14個(gè)省市。發(fā)放5個(gè)批號(hào)樣本，每批調(diào)查品FⅧ（%）的中位數(shù)分別為42.2、