人血漿中凝血因子Ⅷ的分離純化.pdf

1、凝血因子Ⅷ(FⅧ)作為血友病患者維持生命的必須藥品，原料來源是人類血漿，而我國血漿供應(yīng)不足的狀況造成FⅧ制品供應(yīng)嚴(yán)重不足，因此，改進(jìn)從人血漿中分離純化FⅧ的生產(chǎn)工藝，提高國內(nèi)產(chǎn)量是十分必要的。
　　 本文以血漿冷沉淀為基礎(chǔ)，采用層析法分離FⅧ;比較了凝膠過濾、離子交換層析、疏水層析三種層析法從冷沉淀溶液中分離FⅧ的效果，從活性收率和純化倍數(shù)兩個方面比較得出疏水層析對FⅧ這種大分子強(qiáng)疏水性蛋白有較好分離效果;且疏水分離機(jī)制利于保持

2、FⅧ活性;并通過制一系列不同配基密度的介質(zhì)以證實(shí)低配基密度介質(zhì)有利于在層析過程中保持大分子蛋白活性這一現(xiàn)象。
　　 在此基礎(chǔ)上對疏水層析分離條件進(jìn)行優(yōu)化，最終確定層析條件如下:
　　 疏水介質(zhì):Phenyl sepharose 6FF，配基密度20μ mol/ml介質(zhì);
　　 上樣量:冷沉淀溶液二次離心后上清（13.66mg蛋白/ml介質(zhì)）;
　　 上樣流速:1ml/min;
　　 洗脫方式:0～

3、100％B液線性洗脫5個柱體積;
　　 反應(yīng)溫度:25℃
　　 A液:20mM檸檬酸緩沖液+1mM氯化鈣+120mM甘氨酸+1M硫酸銨，pH6.6;
　　 B液:20mM檸檬酸緩沖液+1mM氯化鈣+120mM甘氨酸，pH6.6。
　　 最終得到洗脫峰中FⅧ活性收率62％，相對于原血漿純化倍數(shù)96倍，證明了在優(yōu)化后的層析條件下可以獲得高濃度的FⅧ樣品，使用低配基密度介質(zhì)利于保持目標(biāo)蛋白活性，為進(jìn)一步生產(chǎn)FⅧ