抑制USP18表達(dá)對(duì)人肝癌Hep3B細(xì)胞的抑制作用.pdf

1、 1 分類號(hào)： 密級(jí)： U D C ： 學(xué)號(hào)：406521612521 南 昌 大 學(xué) 碩 士 研 究 生 學(xué) 位 論 文 抑制 抑制 USP18 表達(dá)對(duì)人肝癌

2、 表達(dá)對(duì)人肝癌 Hep3B 細(xì)胞的抑制作用 細(xì)胞的抑制作用 Inhibition of USP18 expression inhibits human hepatocellular carcinoma cell line of Hep3B 顏 偉 培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院 指導(dǎo)教師姓名、職稱：劉安文 主任醫(yī)師 教授 申請(qǐng)學(xué)位的學(xué)科門類：醫(yī)學(xué) 學(xué)科專業(yè)名稱：腫瘤學(xué) 論文答辯日期：2015 年 5 月 25 日 答辯委員

3、會(huì)主席： 徐方云 評(píng)閱人： 陳麗 周存才 2015 年 5 月 25 日摘要 II 摘 要 目的： 目的： 檢測(cè) USP18 在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)及對(duì)其生物學(xué)活性（細(xì)胞增殖、細(xì)胞克隆、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡）的影響。 方法： 方法： 1、通過半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、蛋白印跡（Western Blot）技術(shù)從肝癌細(xì)胞株 HepG2、SMMC7721、Huh7 ，HepG2.2.15 和 Hep3B

4、 中篩選USP18 基因高表達(dá)細(xì)胞株。 2、設(shè)計(jì)并化學(xué)合成針對(duì) USP18 的 3 對(duì)小干擾 RNA(small interfering RNA，siRNA)，采用陽(yáng)離子脂質(zhì)體法瞬間轉(zhuǎn)染。篩選出高表達(dá)細(xì)胞株后，采用離體培養(yǎng)該高表達(dá) USP18 肝癌細(xì)胞，并設(shè) Nomal Control 組、Negative Control 組及USP18- siRNA -1、USP18- siRNA -2、USP18- siRNA -3 各轉(zhuǎn)染組。 3

5、、通過半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和蛋白印跡（Western Blot）法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞中 USP18 在 mRNA 和蛋白水平表達(dá)的變化，明確處理后 USP18 沉默的效果。 4、通過 MTT 比色法描繪生長(zhǎng)曲線和平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞增殖能力的變化。 5、運(yùn)用 Annexin V-FITC/PI 染色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期分布。 結(jié)果： 結(jié)果： 1、RT-PCR 及 Western

6、 blot 結(jié)果顯示：五種肝癌細(xì)胞株中，USP18 基因均有表達(dá)，HBV 陽(yáng)性肝癌細(xì)胞中的表達(dá)高于 HBV 陰性肝癌細(xì)胞，其中 Hep3B 細(xì)胞表達(dá)最高，其次為 HepG2.2.15、Huh7、SMMC7721，在 HepG2 細(xì)胞中表達(dá)最低。選擇 USP18 表達(dá)最高的 Hep3B 細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 2、Hep3B 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 USP18 siRNA 24 h 后，在熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白的表達(dá)情況，隨機(jī)取 10 個(gè)低倍視野，計(jì)