Graves病肝功能損害的動物實驗研究.pdf

1、目的:通過核酸免疫,建立Graves病動物模型.在動物模型的基礎上,了解Graves病肝臟損害的病理變化及其發(fā)病機制,并進一步探討Graves病肝功能損害時小鼠基因群表達水平上的變化,尋找Graves病肝臟損害相關基因.方法:選取6~8周齡的雌性BALB-c小鼠60只,分別在0周、第4周、第8周、第12周對其中45只小鼠進行hTSHR-pcDNA免疫,其余15只注射生理鹽水做空白對照.16周時處死所有小鼠.分析各時間點(0周、第4周、第

2、8周、第12周、第16周)小鼠的體重、血清TsAb、TSH、TT<,4>以及ALT值的變化.并在16周時對小鼠甲狀腺進行稱重、免疫組化分析以及小鼠肝臟組織電鏡觀察.16周時按照TsAb值把所有實驗小鼠分成三組:Graves病組(免疫小鼠,TsAb升高)、陽性對照組(免疫小鼠,TsAb正常)、空白對照組(正常小鼠).觀察三組小鼠ALT的變化、肝組織在電鏡下的不同表現(xiàn),以及Graves病小鼠TsAb、TT<,4>和ALT三個指標之間的關系.

3、將Graves病小鼠按ALT水平分成兩組:對照組(ALT正常水平)和實驗組(ALT水平升高),從兩組小鼠的肝組織中提取mRNA,逆轉(zhuǎn)錄后分別用Cy5(實驗組)和Cy3(對照組)熒光標記,獲得兩組動物來源的cDNA探針,分別與Biodoor基因表達譜芯片雜交,結(jié)果用Scan Array4000掃描儀掃描并用GenePix Pro 3.0軟件分析掃描結(jié)果.重復兩次后,對表達水平差異(上調(diào)或下調(diào))顯著的基因進行RT-PCR驗證.結(jié)論:1、利用