表沒食子兒茶素沒食子酸酯對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞炎癥相關(guān)因子表達(dá)的影響.pdf

1、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate，EGCG)是綠茶多酚中兒茶素的主要成分，具有抗氧化、抗炎、抗癌等生物活性，其中針對(duì)EGCG的化學(xué)預(yù)防和抗炎活性研究已經(jīng)成為熱點(diǎn)。有關(guān)EGCG化學(xué)預(yù)防作用的研究已經(jīng)通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床實(shí)驗(yàn)獲得了一些成果。目前很多體外實(shí)驗(yàn)已證明EGCG對(duì)細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)通路具有調(diào)控作用，這些通路包括JAK/STAT、MAPK、PI3K/AKT、Wnt、Notch、NF-κ

2、B和AP-1。EGCG通過抑制各種轉(zhuǎn)錄因子來調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)各種炎癥相關(guān)因子的表達(dá)，這些轉(zhuǎn)錄因子包括Sp1、NF-κB、AP-1、STAT1、STAT3和FoxO1。近些年研究表明，EGCG對(duì)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的多種促炎因子表達(dá)具有抑制作用，但這一作用的分子機(jī)制還不是完全清楚。目前研究表明，EGCG通過結(jié)合巨噬細(xì)胞表面相應(yīng)的67LR，來下調(diào)巨噬細(xì)胞炎性因子的表達(dá)，從而達(dá)到抗炎消炎的作用。然而，巨噬細(xì)胞作為生物體內(nèi)重要的免疫細(xì)胞，其極化與炎癥的發(fā)生發(fā)

3、展有著密切的聯(lián)系。不同表型的巨噬細(xì)胞對(duì)炎癥的作用也是不同的。M1型巨噬細(xì)胞介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，促進(jìn)炎癥發(fā)生，能夠分泌TNF-α、IL-1β、NO等促炎因子。M1型巨噬細(xì)胞以高表達(dá)iNOS為標(biāo)志;M2型巨噬細(xì)胞對(duì)炎癥具有抑制作用，在組織損傷修復(fù)和纖維化中具有重要作用。M2型巨噬細(xì)胞以高表達(dá)Arg-1為標(biāo)志。因此為了考察EGCG對(duì)巨噬細(xì)胞表型的影響，本課題選取了iNOS和Arg-1兩種炎癥相關(guān)酶來檢測。另外，本課題還選取了在炎癥反應(yīng)中有重要作用的

4、ICAM-1和VCAM-1兩種粘附分子來進(jìn)行檢測。
　　本課題采用LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞作為炎癥模型。所用細(xì)胞分別選取小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞系和原代小鼠腹腔巨噬細(xì)胞。根據(jù)本課題組之前對(duì)RAW264.7細(xì)胞炎癥模型的研究結(jié)果來確定實(shí)驗(yàn)方案。實(shí)驗(yàn)采用EGCG預(yù)處理2h，處理濃度分別為12.5μM、25μM和50μM，同時(shí)設(shè)立空白處理和LPS(1μg/ml)處理作為對(duì)照，然后再用LPS(1μg/ml)處理24h后取材檢測。用

5、實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測iNOS、Arg-1、ICAM-1和VCAM-1的mRNA水平，并用ELISA檢測四種因子蛋白的表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，LPS處理可使iNOS、Arg-1、ICAM-1和VCAM-1基因表達(dá)量升高。經(jīng)過EGCG預(yù)處理后，LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞中iNOS、Arg-1、ICAM-1和VCAM-1的基因表達(dá)量相比LPS組，在mRNA水平和蛋白水平都有所下降。并且，四種因子的表達(dá)量隨著EGCG預(yù)處理濃度的增大，呈現(xiàn)下降趨勢

6、。這表明EGCG(12.5～50μM)預(yù)處理能明顯抑制LPS誘導(dǎo)的小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞系和原代小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中iNOS、Arg-1、ICAM-1、VCAM-1基因的表達(dá)。這種抑制作用是在基因轉(zhuǎn)錄水平上的。EGCG預(yù)處理對(duì)四種因子表達(dá)的抑制作用隨著EGCG濃度的增大而逐漸增強(qiáng)。因此，在12.5～50μM的濃度范圍EGCG對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞四種炎癥相關(guān)因子表達(dá)的抑制作用存在劑量依賴性。根據(jù)本課題研究結(jié)果中iNOS和Arg-