RNAi抑制前列腺癌雄激素受體的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景與研究目的：雄激素受體(androgen receptor，AR)與前列腺癌(prostate cancer，PCa．)的發(fā)生發(fā)展有密切的關(guān)系，最近的研究表明，除了激素依賴性前列腺癌，在激素非依賴性前列腺癌中雄激素受體同樣扮演了重要的角色，因此，在前列腺癌的內(nèi)分泌治療中，雄激素受體的去除將比傳統(tǒng)的雄激素去除或阻斷具有更廣闊的應(yīng)用和更好的治療效果。RNA干擾(RNA interference，RNAi)是新近發(fā)展起來(lái)的一種封閉基因表達(dá)

2、的有效方法，它比反義寡核普酸和核酶技術(shù)能更高效的抑制目的基因的表達(dá)。已有研究表明siRNA(small interferingRNA)能有效地介導(dǎo)RNAi作用，但不同序列的siRNA作用效率高低不同而且難以靠理論推測(cè)，因此本研究針對(duì)AR基因設(shè)計(jì)了5個(gè)不同的siRNA，采用siRNA表達(dá)載體(small interfering RNA expressionvector)的方法轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞PC3，觀察其對(duì)AR基因的沉默作用及不同siRA

3、N的抑制效率，以篩選出高效率的AR特異性siRNA序列。 方法：1，利用NCBI的GeneBank及計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)5個(gè)內(nèi)含不同AR特異性序列的59nt的寡核苷酸片斷，并將其定向克隆入病毒載體pSlF1-H1-Puro，得到真核表達(dá)載體P1、P2、P3、P4、P5。另以一無(wú)意義序列作對(duì)照組，標(biāo)為Pn。2，將表達(dá)載體通過(guò)電穿孔瞬時(shí)轉(zhuǎn)染PC3細(xì)胞，72小時(shí)后提取總RNA和總蛋白，分別行熒光定量PCR和Westeyn Blot檢

4、測(cè)各組AR mRNA和AR蛋白的表達(dá)，比較實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的差異及各實(shí)驗(yàn)組間的差異。 結(jié)果：熒光定量PCR檢測(cè)顯示各實(shí)驗(yàn)組的AR mRNA的表達(dá)較對(duì)照組均不同程度下降，統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)有顯著性差異(P<0.05)。P1、P2、P3、P4、P5的抑制效率分別為83﹪、61﹪、23﹪、87﹪、78﹪，以siRNAl、siRNA4和siRNA5對(duì)應(yīng)的重組質(zhì)粒P1、P4、P5抑制效率最高，對(duì)比其余實(shí)驗(yàn)組有顯著性差異(P<0.05)。Wester