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文檔簡介
1、目的:
研究免疫耐受期、抗病毒治療和停藥復發(fā)的慢性乙型病毒性肝炎患者外周血中HBV特異性CD8+T細胞的水平及免疫功能,探討停藥復發(fā)患者短時間內(nèi)出現(xiàn)嚴重肝損害的可能原因。
方法:
1.研究對象
收集2014年5月至2014年12月就診于南昌大學第一附屬醫(yī)院傳染科的CHB患者111例,經(jīng)HLA-A2組織分型得到HLA-A2+49例,分成三組:免疫耐受組15例,男11例,女4例,平均28.8±8.3歲
2、,均為免疫耐受期患者(即ALT正常、HBeAg陽性、HBV-DNA持續(xù)高水平、肝組織沒有或僅有輕微炎癥);抗病毒治療組20例,男14例,女6例,平均41.0±14.3歲,為經(jīng)過抗病毒治療后HBV-DNA持續(xù)陰性6個月以上;停藥復發(fā)組14例,男10例,女4例,平均44.9±11.2歲,為經(jīng)過核苷(酸)類似物抗病毒治療HBV-DNA轉(zhuǎn)陰至少6個月以上而停藥復發(fā)者。所有患者均符合2010年版《慢性乙型肝炎防治指南》中確定的診斷標準;均排外合并
3、藥物、毒物、酒精、其他病毒、遺傳代謝性疾病等所致肝損者。收集健康者25例,經(jīng)分型得到HLA-A2+者8例,男5例,女3例,平均年齡35.9±9.2歲,作為陰性對照組;排除HAV、HBV、HCV、HDV、HEV及HIV等感染。
2.實驗方法
收集受試者HBV-DNA、HBeAg、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)等臨床指標。HBV-DNA的檢測采用實時熒光定量PCR法,血清HBeAg采用雅培Axsym全自動化學發(fā)光免疫分析儀檢
4、測,ALT采用日立7600型全自動生化分析檢測;采用流式細胞術(shù)進行HLA-A2分型;采用MHC-五聚體流式細胞術(shù)檢測HLA-A2陽性患者HBcAg18-27特異性CD8+T細胞的數(shù)量;分離外周血單個核細胞(PBMC),采用ELISPOT檢測HBV特異性CTL分泌IFN-γ、TNF-α等細胞因子功能。分析各組特異性 T細胞數(shù)量及分泌功能之間的差異,及它們與HBV-DNA、HBeAg之間的相關(guān)性。
結(jié)果:
?。?)免疫耐受
5、組患者HBV特異性CD8+T細胞數(shù)量及免疫功能明顯低于抗病毒治療組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
?。?)在免疫耐受組患者,HBV特異性CD8+T細胞的數(shù)量與血清HBV-DNA滴度、HBeAg之間呈明顯的負相關(guān)(r=-0.882,P<0.001;r=-0.755,P=0.001),細胞因子分泌功能與HBV-DNA滴度、HBeAg之間也呈明顯負相關(guān)性(分泌IFN-γ:r=-0.837,P<0.001;r=-0.787,P<0
6、.001;分泌TNF-α:r=-0.685,P=0.005;r=-0.671,P=0.006)。
?。?)在抗病毒治療組患者,HBV特異性CD8+T細胞的數(shù)量增多,且隨HBV-DNA陰轉(zhuǎn)時間延長、HBeAg水平的下降而增強,恢復峰值出現(xiàn)在HBV-DNA轉(zhuǎn)陰1年左右,之后隨陰轉(zhuǎn)時間延長而表現(xiàn)出降低趨勢,并維持在較低水平。
?。?)停藥復發(fā)組患者HBV特異性CD8+T細胞數(shù)量及免疫功能均高于抗病毒治療組(P<0.05)和免疫
7、耐受組(P<0.01),差異有統(tǒng)計學意義。
(5)三組患者HBV特異性CD8+T細胞的數(shù)量及免疫功能均高于健康對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
結(jié)論:
CHB患者HBV特異性CD8+T細胞的數(shù)量減少及免疫功能受損,可能與T細胞長期暴露在大量HBV抗原環(huán)境中導致T細胞耗竭有關(guān);抗病毒治療能使HBV特異性T細胞的水平及功能得到恢復,但一味的抗病毒治療可能不利于機體特異性抗病毒免疫的維持;停藥復發(fā)患者短
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