地塞米松促進(jìn)β-淀粉樣蛋白的神經(jīng)元毒性及其機(jī)理研究.pdf

1、早老性癡呆(Alzheimer′s disease，AD)是以進(jìn)行性記憶丟失和認(rèn)知能力下降為特征的神經(jīng)退行性疾病。主要病理特征是選擇性的神經(jīng)元突觸損傷、神經(jīng)纖維纏繞(neurofibrillary tangle，NFT)和老年斑(senile plaques，SP)。β-淀粉樣蛋白(Amyloidβ-peptide，Aβ)是構(gòu)成老年斑或淀粉樣斑塊的主要成份，在AD的發(fā)病和進(jìn)展中起關(guān)鍵作用。糖皮質(zhì)激素(glucocorticoids，GC

2、s)是由腎上腺皮質(zhì)束狀帶合成和分泌的類固醇激素，是臨床上應(yīng)用最為廣泛的激素類藥物。海馬是與學(xué)習(xí)記憶、行為和情緒密切相關(guān)的重要腦區(qū)，是GCs最為敏感的神經(jīng)靶位。體內(nèi)高水平GCs可透過(guò)血腦屏障進(jìn)入腦組織，引起海馬突觸丟失、海馬萎縮，加重海馬齒狀回神經(jīng)元凋亡。因此，地塞米松(Dexamethasone，DEX)是否加重Aβ的神經(jīng)元毒性作用有待研究。 目的 在體外實(shí)驗(yàn)條件下，觀察DEX，Ap及其聯(lián)合作用對(duì)海馬神經(jīng)元的影響，以探討

3、GCs是否加重Aβ的神經(jīng)元毒性作用。 方法 取孕 18 天Sprague Dawley(SD)大鼠胚胎的海馬神經(jīng)元進(jìn)行體外原代分離培養(yǎng)，于聯(lián)合實(shí)驗(yàn)中先加入10μM DEX作用24h后，再加入5μM Aβ<,25-35>作用24h后觀察損傷情況。應(yīng)用MTT法進(jìn)行細(xì)胞活力分析；運(yùn)用 TUNEL 法檢測(cè)海馬神經(jīng)元的凋亡情況，觀察其凋亡特征：通過(guò)檢測(cè)神經(jīng)元胞內(nèi) Ca<'2+>濃度、核NF-κB蛋白水平，探討DEX是蠆通過(guò)促進(jìn)海馬

4、神經(jīng)元胞內(nèi) Ca<'2+>和/或抑制核NF-κB蛋白量來(lái)促進(jìn)Aβ的神經(jīng)元毒性；通過(guò)檢測(cè)海馬神經(jīng)元p-tau蛋白含量，進(jìn)一步探討DEX是否通過(guò)提高p-tau水平促進(jìn)Aβ的神經(jīng)元毒性作用；通過(guò)檢測(cè)海馬神經(jīng)元的p53蛋白質(zhì)水平，擬探討海馬神經(jīng)元的凋亡途徑。 結(jié)果 1．細(xì)胞活力檢測(cè)發(fā)現(xiàn)(MTT 法)，DEX(0．01μM～10 μM)和Aβ<,25-35>(1，5μM)對(duì)培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元活性沒(méi)有影響(P>0．05)，但DEX(1

5、，10μM)作用24h后，再和Aβ<,25-35>(1μM，5μM)孵育24h，吸光度(A值)明顯降低(P<0．05)，且呈劑量依賴性。 2．TUNEL法檢測(cè)10μM DEX和5μM Aβ<,25-35>作用海馬神經(jīng)元時(shí)，TUNEL染色的陽(yáng)性細(xì)胞增加不明顯(P>0.05)，但經(jīng)10μM DEX作用24h后，再和5μM Aβ<,25-35>孵育24h，凋亡率明顯增加，與同劑量的DEX和Aβ<,25-35>相比，差異有顯著性(P<0

6、.05)。 3． 10μM DEX作用海馬神經(jīng)元24h，激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)神經(jīng)元胞內(nèi)Ca<'2+>水平?jīng)]有增加(P>0.05)，5μM Aβ<,25-35>處理的神經(jīng)元，胞內(nèi) Ca<'2+>有輕微的升高(P<0.05)，但10μM DEX作用海馬神經(jīng)元24h后，再加入5μM Aβ<,25-35>作用60min，與同劑量的Aβ<,25-35>相比，胞內(nèi)Ca<'2+>濃度明顯增加(P<0.05)。 4．Aβ可劑量依賴性地引

7、起神經(jīng)元核NF-κB蛋白增加。與對(duì)照組(0μM Aβ，0μMDEX)相比，10μM DEX使神經(jīng)元核NF-κB表達(dá)量減少，5μM Aβ<,25-35>能夠增加核NF-κB表達(dá)量，與同劑量的AB相比，DEX+Aβ<,25-35>組的核NF-κB表達(dá)量有顯著性差異(P<0.05)。此外，與對(duì)照組相比，5μM Aβ<,25-35>作用海馬神經(jīng)元時(shí)，胞漿NF-κB和IκBα表達(dá)量降低(P<0.05)，DEX組的胞漿NF-κB和IκBα表達(dá)量增加

8、(P<0.05)，但與同劑量的Aβ組相比，DEX+Aβ<,25-35>組的胞漿NF-κB和IκBα表達(dá)量，有顯著性差異(P<0.05)。 5．與對(duì)照組(0μMAp，0μDEX)相比，10μM DEX不能增加p53蛋白量(P>0.05)，5μM Aβ<,25-35>組的p53蛋白量增加明顯(P<0.05)，DEX+Aβ<,25-35>的p53蛋白表達(dá)量與同劑量Aβ<,25-35>組相比，差異沒(méi)有顯著性(P<0.05)。 6

9、．Aβ<,25-35>能夠呈劑量依賴性的增加海馬神經(jīng)元 p-tau-Thr231 表達(dá)量。與對(duì)照組(0μM Aβ，0μM DEX)相比，10μM DEX作用海馬神經(jīng)元亦能增加p-tau-Thr231的水平，但與同劑量DEX和Aβ<,25-35>組相比，10μM DEX+1μM Aβ<,25-35>組。 結(jié)論 DEX可明顯促進(jìn)Aβ的神經(jīng)元毒性作用，DEX可能通過(guò)促進(jìn)Aβ引起海馬神經(jīng)元胞內(nèi)Ca<'2+>升高、抑制核NF-κB