光動(dòng)力學(xué)療法治療大鼠C6膠質(zhì)瘤的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:建立大鼠腦內(nèi)及裸鼠皮下C6膠質(zhì)瘤模型，分析5-氨基乙酰丙酸(5-Aminolevulinicacid，ALA)、血卟林衍生物(hematoporphyrinderivative，HPD)及ALA+HPD光動(dòng)力學(xué)療法(Photodynamictherapy，PDT)治療C6膠質(zhì)瘤的療效、安全性及PDT的作用機(jī)制，為臨床PDT治療膠質(zhì)瘤提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:本課題第一部分研究立體定向建立大鼠腦深部C6膠質(zhì)瘤模型，觀(guān)察立體定向顱

2、內(nèi)右側(cè)尾狀核接種C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞后10d、15d、20d及生存期觀(guān)察組的MRI、大體及HE染色組織病理、免疫組化檢查(GFAP)、透射電鏡(TEM)和腦組織含水量的變化，來(lái)了解大鼠腦深部C6膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)浸潤(rùn)特性；課題第二部分分析ALA、HPD及ALA+HPDPDT治療大鼠腦深部C6膠質(zhì)瘤的療效、安全性及PDT的作用機(jī)制。在大鼠腦內(nèi)移植入C6膠質(zhì)瘤15d時(shí)，通過(guò)開(kāi)骨窗后非荷瘤鼠PDT(HPD)、荷瘤鼠的單純激光照射及三組光敏劑PDT治療腦深

3、部C6實(shí)體膠質(zhì)瘤，觀(guān)察非荷瘤鼠PDT對(duì)照組、荷瘤鼠單純激光照射組及三組光敏劑PDT后生存期的改變，觀(guān)察荷瘤鼠單純激光照射及三組光敏劑PDT后1、3、5、9d及生存期觀(guān)察組的MRI、腦組織含水量、大體及HE染色組織病理、透射電鏡的變化，并與非荷瘤鼠PDT的變化比較，探索研究PDT治療膠質(zhì)瘤的療效、安全性及PDT地作用機(jī)制；課題第三部分建立C6膠質(zhì)瘤的裸鼠皮下移植瘤，測(cè)量三組光敏劑PDT治療及單純光照射裸鼠皮下膠質(zhì)瘤后3d、7d、10d的腫

4、瘤體積并計(jì)算抑瘤率，然后處死裸鼠行HE染色組織病理觀(guān)察，結(jié)合荷瘤大鼠的三組光敏劑PDT治療的結(jié)果綜合探討PDT的療效、安全性及其作用機(jī)制。 結(jié)果:1.立體定向顱內(nèi)種植C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞荷瘤鼠的癥狀出現(xiàn)于10d后，15-20d內(nèi)癥狀明顯加重。MRI顯示10d時(shí)腫瘤平均直徑約1-2mm，15d時(shí)3-5mm，20d時(shí)4-8mm。荷瘤鼠的生存期觀(guān)察組10只大鼠有3只未死亡，MRI及大體病理顯示腫瘤自發(fā)性縮小，且其中1只腫瘤消失。大體及病理、

5、TEM結(jié)果顯示C6膠質(zhì)瘤血管豐富，邊界模糊，腫瘤向正常腦組織浸潤(rùn)性生長(zhǎng)。腦組織含水量隨腫瘤的生長(zhǎng)明顯加重。顱內(nèi)接種C6膠質(zhì)瘤未發(fā)現(xiàn)顱外轉(zhuǎn)移灶。 2.C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞顱內(nèi)種植大鼠荷瘤后15d經(jīng)ALA、HPD及ALA+HPDPDT治療后生存期觀(guān)察，其平均生存期明顯延長(zhǎng)(80d以上)，荷瘤鼠的單純光照射組平均生存期為38.5d，兩者間存在顯著差異(P＜0.01)，三組光敏劑PDT之間的療效無(wú)明顯差異，且ALA+HPDPDT的1-3d內(nèi)腦

6、組織含水量較ALA及HPD組重。 3.MRI掃描顯示荷瘤鼠三組光敏劑PDT后腫瘤體積明顯縮小，生存期觀(guān)察大鼠MRI掃描均未發(fā)現(xiàn)腫瘤征象，而荷瘤鼠單純光照射后MRI掃描顯示腫瘤體積逐漸增大，與荷瘤鼠三組光敏劑PDT相比較存在顯著差異(P＜0.01)。 4.光鏡結(jié)果顯示非荷瘤鼠HPDPDT1-3d內(nèi)表層腦組織也可見(jiàn)出血死亡，但程度較輕，3d后逐漸恢復(fù)正常；荷瘤鼠單純光照射組光鏡結(jié)果僅1d時(shí)可見(jiàn)瘤內(nèi)充血，但未見(jiàn)瘤周出血及腫瘤細(xì)

7、胞死亡；荷瘤鼠的各組PDT后，光鏡及電鏡結(jié)果1-3d內(nèi)腫瘤及瘤周腦組織出現(xiàn)明顯的血管破裂出血，腫瘤及瘤周區(qū)組織細(xì)胞死亡明顯，5d后腫瘤細(xì)胞周?chē)z質(zhì)纖維增生包裹腫瘤。 5.荷瘤鼠的PDT后及非荷瘤鼠PDT對(duì)照組大鼠的腦組織含水量的測(cè)定結(jié)果顯示3d內(nèi)腦組織含水量明顯增高，3d后逐漸降低，而荷瘤鼠的單純光照射對(duì)照組的腦組織含水量呈持續(xù)上升直至死亡。 6.C6膠質(zhì)瘤裸鼠皮下移植瘤各治療組的對(duì)側(cè)對(duì)照腫瘤體積逐漸增大；裸鼠移植瘤單純

8、光照射后出現(xiàn)小片狀滲血，較PDT組明顯輕，未見(jiàn)腫瘤細(xì)胞死亡，而且腫瘤體積逐漸增大；裸鼠移植瘤三組光敏劑PDT后，腫瘤生長(zhǎng)得到抑制，并出現(xiàn)瘤區(qū)皮下出血。 7.C6膠質(zhì)瘤裸鼠皮下移植瘤各治療組的對(duì)側(cè)對(duì)照10d時(shí)光鏡下可見(jiàn)腫瘤細(xì)胞向間質(zhì)內(nèi)浸潤(rùn)生長(zhǎng)，未見(jiàn)腫瘤細(xì)胞死亡；裸鼠皮下移植瘤單純光照射少見(jiàn)陳舊性出血，未見(jiàn)腫瘤細(xì)胞死亡；三組光敏劑PDT可見(jiàn)腫瘤細(xì)胞死亡及間質(zhì)內(nèi)陳舊性出血。 結(jié)論:1.立體定向建立顱內(nèi)C6膠質(zhì)瘤的成功率高，接種

9、后腫瘤呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，能模擬人腦膠質(zhì)瘤的特性，但大鼠的C6膠質(zhì)瘤存在部分自發(fā)消退，故在該模型評(píng)價(jià)療效時(shí)應(yīng)慎重。 2.ALA、HPD及ALA+HPDPDT后均可明顯延長(zhǎng)荷瘤大鼠的生存期，且在大鼠腦內(nèi)移植瘤和裸鼠皮下移植瘤三組光敏劑PDT之間的療效無(wú)明顯差異。 3.ALA、HPD及ALA+HPDPDT治療能有效殺滅腦內(nèi)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞，而裸鼠皮下移植瘤模型中這三組光敏劑PDT主要表現(xiàn)為抑瘤效應(yīng)。 4.PDT后腦內(nèi)局部的免