MEHP誘導(dǎo)大鼠C6神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞向少突膠質(zhì)細胞分化.pdf

1、目的:DEHP是運用最廣泛的增塑劑,MEHP是其在體內(nèi)的活性代謝產(chǎn)物。近年來,大量流行病學調(diào)查資料顯示嬰幼兒與兒童的DEHP、MEHP的暴露水平高于成人。有實驗研究表明MEHP可以影響神經(jīng)元的增殖分化,流行病學調(diào)查也顯示高水平暴露于DEHP的母親產(chǎn)下的嬰兒神經(jīng)反射情況欠佳。為了探討MEHP是否對神經(jīng)膠質(zhì)細胞產(chǎn)生毒性作用,本實驗采用C6神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞模型研究MEHP對神經(jīng)膠質(zhì)細胞分化的影響。
　　方法:培養(yǎng)未分化的大鼠C6細胞;將未

2、分化的C6細胞置于不同濃度的MEHP(100mg/L、50mg/L、10mg/L、1mg/L)低血清培養(yǎng)基中進行培養(yǎng),培養(yǎng)時間為24小時、48小時,同時設(shè)立對照組(0.1％DMSO);采用MTT及流式細胞術(shù)檢測不同濃度的MEHP對C6細胞活性的影響及是否發(fā)生凋亡;采用倒置顯微鏡觀察各組細胞形態(tài)變化,統(tǒng)計陽性延展細胞百分數(shù);采用免疫熒光和免疫印跡檢測各組MBP、GFAP、PPARγ蛋白表達水平。
　　結(jié)果:1.MTT及流式細胞術(shù)檢測

3、顯示,MEHP影響C6細胞活性,抑制細胞生長,但在該劑量及作用時間范圍內(nèi)不引起凋亡。2.倒置顯微鏡觀察各組細胞形態(tài),對照組大部分未分化C6細胞胞體呈長梭形、有的呈多角形,胞體有短而粗的突起,而暴露于MEHP的實驗組與對照組相比,細胞胞體較光滑、變得更圓,兩端突起變得更細更長;隨著MEHP濃度和作用時間的增加,陽性延展細胞數(shù)增多。3.免疫熒光和免疫印跡結(jié)果顯示,PPARγ、GFAP的表達無明顯差異,而隨著MEHP濃度的增加和作用時間的增加