鈉-碘轉(zhuǎn)運(yùn)體的基因調(diào)控及單克隆抗體的制備與應(yīng)用.pdf

1、目的:(1)探討抗人鈉磺轉(zhuǎn)運(yùn)體(NIS)單克隆抗體的制備方法與臨床實(shí)用價(jià)值.(2)研究細(xì)胞因子對(duì)甲狀腺濾泡細(xì)胞膜上鈉/磺轉(zhuǎn)運(yùn)體(NIS)基因表達(dá)的影響,闡明其在甲狀腺生理功能調(diào)控和甲狀腺疾病發(fā)病機(jī)制中的作用和地位.方法:(1)以人NIS蛋白質(zhì)的兩個(gè)片段(第2膜外段和第14f段)為抗原免疫小鼠,運(yùn)用雜交瘤技術(shù),制備鼠抗人NIS單克隆抗體(rhNIS MAb),采用小鼠Ig亞類測(cè)定試劑條測(cè)定單抗的亞類,并通過ELISA、Western-bl

2、ot、免疫組化染色等方法鑒定其特異性.(2)以制備的單抗為一抗,運(yùn)用免疫組化染色技術(shù)研究不同甲狀腺組織NIS抗原表達(dá)的差異.(3)采用單層細(xì)胞培養(yǎng)及半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)和干擾素-γ(TNF-γ)對(duì)人NIS mRNA表達(dá)的影響.結(jié)論:(1)該研究成功地制備出抗人NIS單克隆抗體,為NIS抗原-抗體的深入研究奠定了基礎(chǔ).此單克隆抗體對(duì)甲狀腺疾病的基礎(chǔ)和臨床