蛔蟲抗菌肽Cecropin P1的克隆及其在大腸桿菌中的表達.pdf

1、目的：傳統(tǒng)抗生素的毒副作用及其耐藥菌株的出現(xiàn)，迫使人們尋找新型的抗微生物制劑。抗菌肽（Antibacterial peptide，ABP）是由動物、植物、昆蟲以及人體基因組編碼的具有抗生素樣活性的肽類物質(zhì)。它是機體免疫系統(tǒng)的重要成分，構(gòu)成宿主防御病原微生物入侵的第一道屏障。抗菌肽除了具有分子量小、熱穩(wěn)定性好、免疫原性較低等特點，還由于其獨特的化學結(jié)構(gòu)，能有效抑殺真菌、病毒、細菌、寄生蟲，而不易產(chǎn)生耐藥性，能選擇性殺滅腫瘤細胞，而對人畜毒

2、副作用極小。因此，抗菌肽作為新藥開發(fā)，具有廣闊的前景?；紫x是寄生于動物和人體內(nèi)的線蟲，從其體內(nèi)分離到的抗菌肽Ceeropin P1顯示有廣譜的殺菌作用。本研究以蛔蟲抗菌肽Cecropin P1為研究對象，利用基因工程的方法制備蛔蟲抗菌肽，并進行了體外抗菌活性測定，為進一步研究其抗菌機理及應用研究打下基礎(chǔ)。 方法：根據(jù)蛔蟲抗菌肽CecropinP1基因序列和氨基酸序列，以及大腸埃希菌對編碼同種氨基酸不同密碼子的偏嗜性，對蛔蟲抗菌肽

3、CecropinP1編碼基因進行改造，人工設(shè)計并合成了3條抗菌肽CecropinP1基因寡核苷酸片段，通過PCR擴增得到抗菌肽CecropinP1基因，將此基因克隆到原核表達載體pET30a中，然后將重組質(zhì)粒pET30a-CecropinP1轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，含有正確重組質(zhì)粒的陽性菌株經(jīng)IPTG誘導進行表達，SDS-APGE電泳觀察表達產(chǎn)物，瓊脂擴散法檢測表達產(chǎn)物體外抑菌活性。 結(jié)果酶切分析、DNA測序等證實Cecropin

4、 P1基因已被正確地插入pET30a中；重組表達質(zhì)粒pET30a-CecropinP1在大腸桿菌BL21中成功地表達了CecropinP1蛋白；重組蛋白具有一定的抗菌活性。 結(jié)論成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pMD-18T-CecropinP1與pET-30a-CecropinP1，并在大腸埃希菌BL21（DE3）中以包涵體形式高效表達，并檢測到CecropinP1對部分病原菌的抗菌作用，為進一步研究蛔蟲抗菌肽CecropinP1奠定了基礎(chǔ)