KDR為靶的反義寡核苷酸，siRNA篩選及活性評(píng)價(jià).pdf

1、 反義寡核苷酸(asON)和新近發(fā)現(xiàn)的RNA干擾是基因治療和基因功能研究的有效工具。但由于靶基因mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的存在，并不是所有的反義分子均可與之有效結(jié)合并阻斷靶基因表達(dá)。 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-2(VEGFR-2/KDR)廣泛分布于血管內(nèi)皮細(xì)胞，且分布于部分腫瘤細(xì)胞表面，通過(guò)兩個(gè)機(jī)制促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展。本研究擬分別采用計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)聯(lián)合寡核苷酸芯片雜交、寡核苷酸庫(kù)雜交聯(lián)合寡核苷酸芯片雜交兩種篩選方法，在KDR mRNA全

2、長(zhǎng)序列范圍內(nèi)篩選可與之高效、特異結(jié)合的反義寡核苷酸，并根據(jù)反義寡核苷酸相應(yīng)雜交靶位點(diǎn)設(shè)計(jì)并構(gòu)建可在細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)期表達(dá)的短發(fā)卡狀小干擾RNA(siRNA)，在人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7內(nèi)觀察了asON，siRNA的抗腫瘤作用，并對(duì)阻斷KDR蛋白表達(dá)后，一些通路信號(hào)蛋白的表達(dá)變化作了初步探討；最后利用MCF-7乳腺癌荷瘤裸鼠模型探討了KDR反義寡核苷酸的體內(nèi)抗腫瘤作用，為之將來(lái)應(yīng)用于臨床提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法：1.KDR基因的克隆。2.計(jì)算