巨噬細(xì)胞對前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3作用及機(jī)制的探討.pdf

1、目的：研究巨噬細(xì)胞對人的前列腺癌細(xì)胞（PC-3）的增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響及其對前列腺癌血管形成的作用，并探討其中的機(jī)制。
　　方法：CD14+免疫磁珠法分選人外周血中的單核細(xì)胞，加入M-CSF（50ng/ml）誘導(dǎo)7天后將單核細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榫奘杉?xì)胞，然后將其極化為四個亞型；其中，加入無FBS的RPMI1640培養(yǎng)基誘導(dǎo)48h的巨噬細(xì)胞 M0亞型，加入 LPS（100 ng/ml）和IFN-γ（100 ng/ml）共同刺激誘導(dǎo)過夜

2、的巨噬細(xì)胞M1亞型，加入IL-4（20 ng/ml）刺激過夜的的巨噬細(xì)胞M2亞型，而在含有50％的PC-3條件培養(yǎng)基中培養(yǎng)誘導(dǎo)7天的單核細(xì)胞將會極化為TAM亞型，高內(nèi)涵細(xì)胞成像分析系統(tǒng)檢測四種巨噬細(xì)胞亞型表面標(biāo)志CD14/CD163表達(dá)水平的差異；熒光定量 PCR檢測四種巨噬細(xì)胞亞型中IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12、IL-23、CXCL9、CCL13以及l(fā)et-7家族的mRNA的相對表達(dá)水平；ELISA酶聯(lián)免疫法檢測四種巨

3、噬細(xì)胞亞型的上清液中TGF-β、TNF-α、IL-10、IL-12的表達(dá)水平；MTT法檢測四種巨噬細(xì)胞亞型對前列腺癌細(xì)胞PC-3增殖的作用差異；凋亡試劑盒檢測四種巨噬細(xì)胞亞型對前列腺癌細(xì)胞 PC-3凋亡的影響；劃痕實(shí)驗(yàn)法和Transwell小室法檢測四種巨噬細(xì)胞亞型對前列腺癌細(xì)胞PC-3遷移和侵襲的影響；體外血管形成實(shí)驗(yàn)檢測四種巨噬細(xì)胞亞型對前列腺癌細(xì)胞PC-3血管生成的影響。
　　結(jié)果：在四種亞型的巨噬細(xì)胞中，實(shí)時PCR檢測到細(xì)

4、胞因子IL-1β、IL-6、IL-12、IL-23與CXCL9在M1亞型中的mRNA表達(dá)水平顯著高于M0、M2和TAM亞型，而IL-10在M2亞型及TAM亞型中的mRNA表達(dá)水平顯著高于M0和M1亞型，CCL13在M2亞型中的mRNA表達(dá)量明顯高于其他三種亞型；ELISA酶聯(lián)免疫法檢測到IL-10與IL-12在四種亞型上清液中的表達(dá)趨勢和實(shí)時PCR的結(jié)果是一致的，TGF-β在TAM亞型上清液中是顯著高于其他三種亞型的，而TNF-α則是在

5、M1亞型的上清液中表達(dá)水平最高；另外，熒光定量PCR還檢測到let-7家族中，mRNA的表達(dá)差異倍數(shù)最顯著的三個亞型分別是let-7b、let-7c和let-7g-5bp，其中l(wèi)et-7b和let-7c在TAM亞型中的mRNA的表達(dá)水平明顯高于其他三種亞型，而let-7g-5bp的mRNA的表達(dá)水平在M2亞型中是明顯升高的；M0和M1亞型的巨噬細(xì)胞能夠抑制前列腺癌細(xì)胞PC-3的增殖，M2和TAM亞型則能夠明顯促進(jìn)PC-3細(xì)胞的增殖；四種

6、亞型的巨噬細(xì)胞對PC-3細(xì)胞的凋亡作用并沒有顯著的差異；M2和TAM亞型能顯著促進(jìn)PC-3細(xì)胞的遷移和侵襲能力，以及促進(jìn)前列腺癌的血管生成。
　　結(jié)論：M1亞型的巨噬細(xì)胞能夠抑制前列腺癌細(xì)胞PC-3的增殖；M2亞型和TAM亞型能夠促進(jìn)PC-3細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲以及前列腺癌的血管形成能力；其作用機(jī)制可能與不同亞型巨噬細(xì)胞的細(xì)胞因子表達(dá)譜相關(guān)；microRNAlet-7家族中l(wèi)et-7b與 let-7g-5bp的差異表達(dá)可能會調(diào)控