縫隙連接在左旋多巴誘發(fā)異動癥發(fā)生機制中的作用.pdf

1、背景：左旋多巴誘發(fā)異動癥(levodopa-induced dyskinesia,LID)是帕金森病藥物治療常見運動并發(fā)癥,慢性不規(guī)則多巴胺刺激是LID形成的重要誘因,其發(fā)生與基底節(jié)神經(jīng)元異常同步化和振蕩活動關系密切。縫隙連接(gap junction,GJ)是由連接相鄰2個細胞之間的連接通道排列而成的一種特殊膜結構,參與細胞間信息、能量和物質的交換、代謝偶聯(lián)和電信號偶聯(lián)。GJ是神經(jīng)元同步化活動重要機制,其功能受到多巴胺能刺激的調(diào)節(jié)。這

2、些線索提示縫隙連接功能異?？赡軈⑴c左旋多巴誘發(fā)異動癥發(fā)生機制。我們前期的實驗通過免疫組化證實了LID組紋狀體和運動皮層Cx36表達較PD組和正常對照組顯著增多,支持了該設想。本實驗將進一步探討縫隙連接在左旋多巴誘發(fā)異動癥發(fā)生機制中的作用。
　　目的：通過了解不同濃度的縫隙連接阻斷劑甘珀酸(carbenoxolon,CBX)及奎寧(quinine,QN)對左旋多巴誘發(fā)異動癥大鼠異動行為的影響,觀察異動癥大鼠縫隙連接蛋白Cx36在不同

3、類型紋狀體神經(jīng)元的表達差異和基底節(jié)運動皮層蛋白水平的變化,探討縫隙連接功能異常在異動癥發(fā)生機制中的作用。
　　方法：6-羥多巴胺偏側帕金森病大鼠模型重復腹腔注射左旋多巴(20mg/kg)和卞絲肼(10mg/kg)共21天,以建立左旋多巴誘發(fā)異動癥模型。將大鼠分為三組:LID組、PD組、正常對照組。①通過LID大鼠腹腔注射不同劑量的CBX與側腦室注射奎寧來觀察縫隙連接阻斷劑對異動癥大鼠行為學的影響。②免疫雙標法分析各組腦啡肽(ENK

4、)陽性紋狀體傳出神經(jīng)元及小清蛋白(parvalbumin)陽性中間神經(jīng)元CX36表達情況。③Western-blot檢測各組紋狀體及運動皮層Cx36蛋白表達。
　　結果：①行為學研究顯示大劑量(>60mg/kg)的甘珀酸腹腔注射和奎寧側腦室注射(>2.5μmol)能減少異動癥大鼠的AIM評分(P<0.05)。②免疫雙標顯示異動癥大鼠損毀側紋狀體腦啡肽陽性神經(jīng)元Cx36表達(57.59％±5.36%)較正常對照組(32.67%±4.

5、22%)和PD組(37.24%±0.86%)增強(F=78.060,P<0.01),小清蛋白陽性中間神經(jīng)元Cx36表達(68.49%±11.60%)也較正常對照組(40.43%±2.30%)和PD組(31.92%±5.68%)增強(F=39.567,P<0.01)。③白質印跡檢測顯示異動癥大鼠損毀側紋狀體和運動皮質Cx36表達水平分別為(219.56%±18.12%)、(226.03%±16.33%),高于正常對照組的(104.05%±

6、3.82%)(t=15.389,P<0.01)、(105.27%±2.82%)(t=8.074,P<0.01)和PD組的(119.31%±8.92%)(t=13.356,P<0.01)、(138.20%±17.88%)(t=5.872,P<0.01)。
　　結論：左旋多巴誘發(fā)的異動癥大鼠損傷側紋狀體及運動皮層的Cx36蛋白表達水平增強,紋狀體ENK陽性傳出神經(jīng)元Cx36表達水平上調(diào),且Parvalbumin陽性中間神經(jīng)元Cx36表