胸腺素β4促進(jìn)肝前體細(xì)胞分化為肝細(xì)胞的體外研究.pdf

1、目的：
　　探索胸腺素β4（Tβ4）對(duì)肝前體細(xì)胞（WB-F344細(xì)胞）增殖及分化的影響，研究Tβ4誘導(dǎo)分化細(xì)胞的功能，為T(mén)β4在促進(jìn)肝前體細(xì)胞分化，促進(jìn)肝再生方面提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.用含不同濃度Tβ4的等量培養(yǎng)液體外培養(yǎng)WB-F344細(xì)胞，培養(yǎng)液中Tβ4濃度分別為1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1μg/ml，相應(yīng)命名為1ng/ml組、10ng/ml組、100ng/ml組、1μg/ml組，

2、以無(wú)Tβ4培養(yǎng)液培養(yǎng)的細(xì)胞為空白對(duì)照組。在加入處理因素培養(yǎng)細(xì)胞1天、2天及3天后，采用CCK-8方法檢測(cè)各組Tβ4對(duì)F344細(xì)胞增殖的影響，同時(shí)觀察Tβ4對(duì)WB-F344細(xì)胞形態(tài)的影響。
　　2.選擇對(duì)WB-F344細(xì)胞增殖影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的組（10ng/ml組、100ng/ml組、1μg/ml組），同時(shí)設(shè)立空白對(duì)照組，采用qRT-PCR方法檢測(cè)肝細(xì)胞標(biāo)志物（白蛋白）、肝干細(xì)胞標(biāo)志物（甲胎蛋白）及膽管細(xì)胞標(biāo)志物(細(xì)胞角蛋白-19)

3、基因的表達(dá)，采用Western blot方法檢測(cè)白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)及細(xì)胞角蛋白-19(CK-19)蛋白的表達(dá)，確定Tβ4可誘導(dǎo)WB-F344細(xì)胞分化為何種細(xì)胞。在加入處理因素5天后，觀察Tβ4誘導(dǎo)細(xì)胞的糖原合成功能，吲哚靛青綠攝取情況，研究Tβ4誘導(dǎo)細(xì)胞可發(fā)揮的功能。
　　結(jié)果：
　　1.細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):加入處理因素1天及2天后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異，而在加入處理因素3天后，10ng/ml

4、組、100ng/ml組、1μg/ml組較對(duì)照組相比，細(xì)胞增殖速度減緩(P＜0.05)。同時(shí)，Tβ4誘導(dǎo)培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核由肝前體細(xì)胞的單核細(xì)胞向肝細(xì)胞樣細(xì)胞的雙核或多核細(xì)胞轉(zhuǎn)變。
　　2.在加入處理因素后3天后，qRT-PCR結(jié)果顯示:100ng/ml組、1μg/ml組較對(duì)照組相比，ALB基因表達(dá)量明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），Western blot結(jié)果顯示:10ng/ml組、100ng/ml組、1μg/ml組較

5、對(duì)照組相比，CK-19蛋白表達(dá)量下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。在加入處理因素5天后，Western blot結(jié)果顯示:10ng/ml組、100ng/ml組、1μg/ml組較對(duì)照組相比，AFP蛋白表達(dá)量下降（P均＜0.05），在100ng/ml組、1μ/ml組較對(duì)照組相比，ALB蛋白表達(dá)量增加（P均＜0.05），呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。
　　3.在細(xì)胞功能方面:在加入處理因素后5天后，糖原染色結(jié)果及ICG攝取實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示T