骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)誘導(dǎo)分化為內(nèi)耳毛細(xì)胞前體細(xì)胞的研究.pdf

1、背景: 感音性神經(jīng)性耳聾在臨床上很常見,主要由衰老、噪聲、耳毒性藥物、外傷、感染、腫瘤、遺傳性疾病和免疫性疾病等疾病引起的耳蝸毛細(xì)胞損害所致.常可引起永久性的聽力下降,治療非常困難.隨著干細(xì)胞研究的深入,通過(guò)干細(xì)胞移植或再生補(bǔ)償毛細(xì)胞的損失,是迄今研究最活躍的領(lǐng)域之一. 骨髓問(wèn)充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)是骨髓中除了造血干細(xì)胞以外的另一類成體干細(xì)胞,這類細(xì)胞具有高度自我更新和多向分化的潛能.在不同條件下MSCs可以定向誘導(dǎo)分化

2、為成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肌腱細(xì)胞、心肌細(xì)胞、肝細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞.MSCs來(lái)源廣泛,取材方便,不受醫(yī)學(xué)倫理學(xué)和法律的制約;且具有免疫源性弱的特點(diǎn).探索MSCs誘導(dǎo)分化為內(nèi)耳毛細(xì)胞的可能性,試圖為干細(xì)胞移植治療感音神經(jīng)性耳聾提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ). 方法: 實(shí)驗(yàn)用貼壁法提取大鼠MSCs,體外培養(yǎng)純化到第四代后,選取表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF-1)、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BD

3、NF)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(NT-3)、全反式維甲酸(ATRA)等因子,組合成不同的誘導(dǎo)條件,加入MSCs基礎(chǔ)培養(yǎng)液(2﹪FBS+1﹪N2+低糖DMEM液)中,誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化.在誘導(dǎo)過(guò)程中,動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞形態(tài)變化,并用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)毛細(xì)胞前體細(xì)胞或毛細(xì)胞特異性抗原myosinⅥ、pax-2、nestin、P27<'kipl>是否在誘導(dǎo)后的細(xì)胞表達(dá). 結(jié)果: 1.EGF+IGF-1和EGF+IGF-1+BDNF+

4、ATRA誘導(dǎo)組,細(xì)胞形態(tài)呈短梭形樣、方形樣,未形成突觸.前組myosinⅥ表達(dá)弱陽(yáng)性、pax-2表達(dá)中度陽(yáng)性;后組myosinⅥ和pax-2表達(dá)均呈中度陽(yáng)性.且nestin和P27<'kip1>也陽(yáng)性表達(dá). 2.加入NT-3、bFGF和BDNF的誘導(dǎo)組,細(xì)胞變圓或變細(xì)長(zhǎng),逐漸伸出突觸,部分細(xì)胞形成網(wǎng)絡(luò)狀、大環(huán)狀結(jié)構(gòu);有突觸的細(xì)胞,nestin表達(dá)中度陽(yáng)性,而其他漸變的細(xì)胞表達(dá)弱或無(wú);這種變化在加)kNT-3和bFGF的誘導(dǎo)組尤其

5、顯著. 4.同一誘導(dǎo)條件下,密集區(qū)細(xì)胞先變圓,以后如有空間逐漸伸出多個(gè)短突觸,否則仍維持圓形;不密集區(qū)細(xì)胞先變細(xì)長(zhǎng),以后兩端逐漸形成長(zhǎng)突觸. 5.未誘導(dǎo)組骨髓間充質(zhì)細(xì)胞,nestin表達(dá)弱陽(yáng)性;細(xì)胞呈梭形樣,邊界模糊,碎片增多. 結(jié)論: 1.骨髓間充干細(xì)胞可誘導(dǎo)分化為毛細(xì)胞前體細(xì)胞和神經(jīng)前體細(xì)胞. 2.EGF+IGF-1+BDNF+ATRA可作為較佳誘導(dǎo)組,使骨髓間充干細(xì)胞分化為毛細(xì)胞前體細(xì)胞.