間尼索地平質(zhì)量控制與藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、間尼索地平(m-nisoldipine)是河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院自主研發(fā)的國家一類新藥,存在一對光學(xué)異構(gòu)體(R,S-m-nisoldipine),是新的1,4-二氫吡啶類血管擴(kuò)張性鈣通道受體拮抗劑,適用于心絞痛和高血壓的治療,目前處于臨床前研究。
　　 本實(shí)驗(yàn)旨在建立用膠束電動(dòng)毛細(xì)管電泳法測定間尼索地平及其有關(guān)物質(zhì)的含量,建立環(huán)糊精電動(dòng)毛細(xì)管電泳法手性分離間尼索地平對映體的方法,為間尼索地平的質(zhì)量控制提供新的手段。利用微生物轉(zhuǎn)化法進(jìn)

2、一步研究間尼索地平的代謝,發(fā)現(xiàn)并確定代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu),總結(jié)間尼索地平及其代謝產(chǎn)物的質(zhì)譜裂解規(guī)律,最后采用高效液相質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(HPLC-MS)分析測定大鼠體內(nèi)的間尼索地平和代謝產(chǎn)物,闡明間尼索地平的代謝規(guī)律,為評估母體藥物和代謝產(chǎn)物的藥理學(xué)和毒理學(xué)性質(zhì)、理解不同藥物在代謝過程中發(fā)生相互作用和產(chǎn)生的毒副作用、進(jìn)一步改造藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)提供依據(jù)和研究思路。
　　 第一部分膠束電動(dòng)毛細(xì)管電泳法測定間尼索地平原料藥的含量
　　 目的:

3、建立間尼索地平的膠束電動(dòng)毛細(xì)管電泳測定方法。
　　 方法:以未涂層融硅石英毛細(xì)管(60 cm×75μm,有效長度50 cm)為分離柱,10 mmol/L磷酸二氫鈉-5 mmol/L硼砂緩沖溶液+30 mmol/L十二烷基硫酸鈉(pH8.1)為電泳介質(zhì),在分離電壓為30 kV,紫外檢測波長為214 nm的條件下對間尼索地平進(jìn)行測定。
　　 結(jié)果:建立了間尼索地平的膠束電動(dòng)毛細(xì)管電泳測定方法,間尼索地平在30～120 mg/

4、L的濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為r=0.9990,檢測限為0.9 mg/L。
　　 結(jié)論:該方法簡便、快速、分析成本低,同樣適合用于間尼索地平的含量測定,更適用于藥物在生產(chǎn)與貯藏過程中的質(zhì)量控制及雜質(zhì)檢查。
　　 第二部分環(huán)糊精電動(dòng)毛細(xì)管電泳法手性分離間尼索地平對映體
　　 目的:建立分別用SBE-β-CD和CM-β-CD手性拆分間尼索地平對映體的方法。
　　 方法:分別用SBE-β-C

5、D和CM-β-CD手性拆分間尼索地平對映體,詳細(xì)考察手性選擇劑、pH、緩沖溶液的種類和濃度、有機(jī)改性劑和溫度對分離試驗(yàn)的影響。通過與尼索地平和尼莫地平比較,探討可能的手性識別機(jī)制。
　　 結(jié)果:建立了分別用SBE-β-CD和CM-β-CD手性分離間尼索地平對映體的方法,結(jié)果表明SBE-β-CD更適合于其對映體的拆分,而且SBE-β-CD的取代度為7.0的分離效果比4.0的好。證實(shí)了二氫吡啶環(huán)才可能是地平類化合物的主要手性識別位點(diǎn)

6、;4位苯基上的硝基位置的不同分離效果也不同,其鄰位上的硝基(如尼索地平)可增加環(huán)糊精對其的手性識別能力。
　　 結(jié)論:環(huán)糊精電動(dòng)毛細(xì)管電泳法是手性分離間尼索地平對映體的另一備選手段,為間尼索地平的制劑及體內(nèi)后續(xù)研究工作打下基礎(chǔ)。提出的手性識別機(jī)制證實(shí)了文獻(xiàn)報(bào)道的論斷,為其它二氫毗啶類藥物的CD-EKC分離提供理論依據(jù)。
　　 第三部分膠束電動(dòng)毛細(xì)管電泳法同時(shí)測定間尼索地平及其有關(guān)物質(zhì)
　　 目的:建立間尼索地平及

7、其有關(guān)物質(zhì)的膠束電動(dòng)毛細(xì)管電泳測定方法。
　　 方法:以未涂層融硅石英毛細(xì)管(60 cm×75μm,有效長度11 cm)為分離柱,20 mmol/L硼砂+20 mmol/L十二烷基硫酸鈉+體積比為15％的乙腈(pH8.68)為緩沖溶液,在分離電壓為25 kV、溫度24℃、紫外檢測波長為214 nm的條件下對間尼索地平及其有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行分離測定,同時(shí)考察影響分離效果的因素,并用該法研究間尼索地平的加速試驗(yàn)。
　　 結(jié)果:建立

8、了膠束電動(dòng)毛細(xì)管電泳法同時(shí)測定間尼索地平及其有關(guān)物質(zhì)的方法,6種物質(zhì)在9 min全部實(shí)現(xiàn)基線分離。試驗(yàn)中,十二烷基硫酸鈉及乙腈的濃度對分離效果影響較大。在考察間尼索地平的加速試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)其對光較穩(wěn)定,但易被氧化成另一未知化合物。
　　 結(jié)論:該方法快速、分析成本低,為間尼索地平的質(zhì)量控制提供了新的方法,同時(shí)也為地平類其他化合物的毛細(xì)管電泳分離測定提供參考。
　　 第四部分 HPLC-PDA微生物轉(zhuǎn)化法研究間尼索地平的代謝物

9、
　　 目的:建立微生物轉(zhuǎn)化研究間尼索地平代謝產(chǎn)物的方法,確定代謝物的結(jié)構(gòu)及轉(zhuǎn)化途徑。
　　 方法:通過比較14種加藥菌液樣品和相對應(yīng)的菌空白、藥物空白的HPLC-PDA圖譜,發(fā)現(xiàn)代謝物并進(jìn)行放大制備。
　　 結(jié)果:經(jīng)1H-NMR、13C-NMR及ESI-MS2確定了間尼索地平2個(gè)代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu),并推斷出間尼索地平的微生物轉(zhuǎn)化途徑。
　　 結(jié)論:微生物轉(zhuǎn)化可模擬間尼索地平的體內(nèi)代謝,是研究藥物代謝的一種切

10、實(shí)可行的方法。
　　 第五部分 HPLC-MS法測定大鼠血漿中間尼索地平及其3個(gè)主要代謝物
　　 目的:建立間尼索地平及其3個(gè)主要代謝物的LC-MS-MS測定方法,研究代謝物的體內(nèi)變化趨勢。
　　 方法:6只SD大鼠,按大鼠體重以9 mg/kg的給藥量灌胃給予間尼索地平。分別在15,30,60,90,120,180,300,480,720,1440 min不同時(shí)間點(diǎn)取血,置于肝素化離心塑料管中,離心取血漿,經(jīng)過液

11、液萃取后,進(jìn)樣10μm進(jìn)行LC-MS-MS分析。血漿樣品的分析測定采用SymmetryRP-C18分析色譜柱(150 mm×4.6 mm I.d.,5μm),在室溫條件下,以乙腈:水(72∶28,v/v)為流動(dòng)相,流速為0.8 ml/min。掃描方式采用多重反應(yīng)監(jiān)測;間尼索地平和代謝物M1采用ESI負(fù)離子檢測,而代謝物M及M2采用ESI正離子檢測。
　　 結(jié)果:首次建立了間尼索地平及其3個(gè)主要代謝物的LC-MS-MS測定方法,方

12、法學(xué)驗(yàn)證的數(shù)據(jù)均在要求的范圍之內(nèi),并成功應(yīng)用于大鼠口服給藥后間尼索地平及其代謝物的血藥濃度測定。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)各代謝物的藥時(shí)曲線趨勢與間尼索地平的趨勢類似,而且活性代謝物M1的濃度與母藥濃度相當(dāng),故該代謝物也可能對間尼索地平的藥理活性有貢獻(xiàn)。在檢測代謝物M時(shí)所用的離子對m/z387.3→331.3發(fā)現(xiàn)了另一個(gè)未知化合物,其分子量與M相同(386),可能為代謝物M的同分異構(gòu)體,但其詳細(xì)結(jié)構(gòu)還需進(jìn)一步研究。
　　 結(jié)論:本法靈敏度高,適合