miR-140-5p通過靶向調節(jié)TGFBR1和FGF9抑制肝細胞癌增殖和侵襲轉移.pdf

1、肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是世界上最常見的惡性腫瘤之一，特別是在中國。其每年全球新發(fā)病例數(shù)為74.8萬，而死亡病例數(shù)為69.5萬。死亡率高居所有男性惡性腫瘤的第二位，女性惡性腫瘤的第六位。近十年來由于肝切除技術已有顯著提高，肝癌的手術切除率也顯著增加，術后并發(fā)癥與死亡率也已顯著降低。然而，目前來說肝癌的總體療效仍難以令人滿意，其5年生存率長期徘徊于30％-40％，甚至更低。而肝癌術后5年的復發(fā)轉

2、移率則高達70％以上。究其原因，肝癌術后發(fā)生的復發(fā)轉移是影響肝癌長期生存的根本障礙所在。因此，深入研究探索肝癌復發(fā)轉移的的分子機制，篩選與研發(fā)相關的關鍵干預靶點，對于肝癌術后復發(fā)轉移的防治具有十分重要的理論意義與實際價值。
　　最新的研究顯示microRNA（miRNA）在這一過程中起著關鍵性的作用?，F(xiàn)已弄清miRNA是一類高度保守的、長度為17～25nt的單鏈非編碼RNA分子，可通過與特定靶基因mRNA互補位點的結合在轉錄后水平

3、調控靶基因的表達，具有廣泛的生物學功能。隨著研究的深入，越來越多的證據(jù)顯示miRNA與肝癌的發(fā)生發(fā)展密切相關。本研究以孤立性大肝癌（Solitary large hepatocellular carcinoma，SLHCC）為切入點，比較不同復發(fā)轉移潛能的孤立性大肝癌、小肝癌(SHCC)和結節(jié)性肝癌(NHCC)的miRNAs表達譜及其表達差異。我們初步發(fā)現(xiàn)miR-140-5p在上述三種不同類型的肝癌中均呈顯著性低表達(p＜0.05)，而

4、且SLHCC和SHCC中miR-140-5p的表達水平均顯著高于NHCC(P＜0.05)。這提示我們miR-140-5p可能在肝癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。因此，在本研究中我們以miR-140-5p作為研究目標，深入研究其在肝癌中的表達水平、生物學作用及其作用機制。
　　本研究首先通過采用實時定量PCR檢測了120例肝癌組織(HCC)及相應的癌旁非瘤肝組織(ANLT)中miR-140-5p的表達水平，發(fā)現(xiàn)在肝癌組織中miR-

5、140-5p呈顯著低表達(P＜0.05)，而且其低表達與肝癌的臨床病理特和肝癌的不良預后具有顯著相關性(P＜0.05)。接著我們又檢測了六種肝癌細胞系中miR-140-5p的表達水平，發(fā)現(xiàn)其表達水平均明顯低于正常肝細胞系L02(P＜0.05)。為了研究miR-140-5p在肝癌發(fā)生發(fā)展中所發(fā)揮的作用，我們構建了過表達miR-140-5p的肝癌細胞系，并通過劃痕愈合、Transwell侵襲小室、MTT生長曲線、克隆形成和流式細胞儀檢測細胞

6、周期等一系列功能學實驗證實miR-140-5p可在體外抑制肝癌細胞的侵襲轉移和增殖能力。繼之采用裸鼠原位成瘤模型在體內證實miR-140-5p可在體內同樣發(fā)揮抑制肝癌細胞侵襲轉移和增殖的作用。鑒于miRNA必須通過調控其靶基因的轉錄后表達水平才能發(fā)揮其生物學功能，我們又先后采用腫瘤多信號通路篩選、生物信息學預測、雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)、Western-blot、免疫組化(IHC)和一系列體外功能學實驗方法證實TGFBR1和FGF9是mi