miR-144靶向ROCK1抑制肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、目的：研究miR-144靶向ROCK1與肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系，探討生物信息學(xué)方法用于預(yù)測靶miRNA可行性。
　　方法：選取經(jīng)病理證實(shí)的42例肝癌標(biāo)本，28例癌旁正常肝組織標(biāo)本，通過免疫組化檢測ROCK1蛋白的表達(dá)；生物信息學(xué)方法預(yù)測ROCK1的靶miRNAs并分析與其結(jié)合最穩(wěn)定、特異性最好的靶 miRNA；qRT-PCR技術(shù)檢測 miR-144與ROCK1的結(jié)合情況，分析miR-144與肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移關(guān)系；Western blot檢

2、測miR-144靶向ROCK1抑制其表達(dá)，Transwell實(shí)驗(yàn)分析miR-144下調(diào)ROCK1表達(dá)后，肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力改變。
　　結(jié)果：
　　(1)生物信息學(xué)方法獲得了17個(gè)ROCK1的靶miRNAs，其中與ROCK1結(jié)合最穩(wěn)定、特異性最好的是miR-144。
　　(2) ROCK1在肝癌中表達(dá)陽性率為76.2％（32/42），癌旁正常肝組織中表達(dá)陽性率為28.6%（8/28）,兩者有顯著性差異（P＜0.05）。

3、
　　(3)低轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞株中ROCK1低表達(dá)，而miR-144高表達(dá)；高轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞株中ROCK1高表達(dá)，而miR-144低表達(dá)，說明miR-144可抑制ROCK1表達(dá)，與肝癌轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.053）。
　　(4) HepG2-miR-144 mimics細(xì)胞株中miR-144表達(dá)增高，而ROCK1表達(dá)下調(diào)；而HepG2、HepG2-miR-Scramble、HepG2-miR-144-PM三個(gè)細(xì)胞株中miR-144

4、表達(dá)水平和ROCK1表達(dá)水平?jīng)]有明顯變化。說明，miR-144能和ROCK1 mRNA結(jié)合下調(diào)其表達(dá)水平。
　　(5) HepG2-miR-144 mimics侵襲細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯低于其他三組（P＜0.05）， HepG2、HepG2-miR-Scramble、HepG2-miR-144-PM三組之間侵襲細(xì)胞計(jì)數(shù)無顯著性差異（P＞0.05）。說明增加miR-144表達(dá)能抑制ROCK1表達(dá)，從而抑制肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。
　　結(jié)論：<