三氧化二砷誘導(dǎo)K562-A02細胞凋亡及逆轉(zhuǎn)其多藥耐藥機制的研究.pdf

1、目的：研究三氧化二砷（As2O3）誘導(dǎo)白血病多藥耐藥細胞株K562/A02細胞凋亡的效應(yīng)及對多藥耐藥基因1(mdr1)、P糖蛋白（P-gp）和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）表達的影響，探討As2O3逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥的分子機制。
　　方法：將K562/A02細胞與不同濃度的As2O3（0μmol/L，0.5μmol/L，2.0μmol/L，5.0μmol/L）共同孵育,分別在24、48、72 h時，用Wright’s染色法在倒置顯微

2、鏡下，AnnexinV-FITC/PI染色激光共聚焦(LSCM)下觀察K562/A02細胞形態(tài), AnnexinV-FITC/PI染色流式細胞儀（FCM）檢測凋亡細胞,MTT法檢測K562/A02細胞增殖活性，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測K562/A02細胞mdr1 mRNA的表達，免疫組化法觀察P-gp表達，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA)檢測K562/A02細胞上清液中VEGF的濃度。
　　結(jié)果：隨著As2O3濃度-時間

3、的增加，K562/A02細胞的數(shù)目減少，細胞碎片增多，K562/A02細胞出現(xiàn)典型的染色質(zhì)濃集，核碎裂等凋亡形態(tài)學(xué)改變。MTT顯示在（0.5μmol/L，72h）As2O3組開始，K562/A02細胞的增殖抑制率為(13.23±2.56)％(P<0.05)，到（5.0μmol/L，72h）As2O3組時，K562/A02細胞的增殖抑制率上升至(61.78±2.27)%(P<0.05). Annexin V-FITC/PI顯示隨著As2O

4、3處理時間的增加，發(fā)生凋亡的細胞增多。流式細胞儀顯示5.0μmol/LAs2O3處理24h、48 h、72 h后的K562/A02細胞，隨著處理時間的增加，細胞凋亡率逐漸上升至（31.58±0.92）%、（36.82±1.13）%和（53.95±1.04）%。從As2O348h處理組開始，mdr1 mRNA及P-gp的表達出現(xiàn)顯著性降低(P<0.05)，在（0.5μmol/l，48h）As2O3組時，mdr1 mRNA條帶顏色較空白對照

5、組明顯變淺，mdrl/GAPDH的灰度比值下降至0.363±0.079（P<0.05)，此時，P-gp的灰度值上升至108.71±3.54(P<0.05)，且隨As2O3作用濃度和作用時間的增加，mdr1 mRNA條帶顏色進一步變淺，到（5.0μmol/l，72h）As2O3組時，mdrl/GAPDH的灰度比值進一步下降為0.139±0.018（P<0.05)，P-gp的灰度值則進一步上升至132.04±3.88（P<0.05)。ELI

6、SA法檢測表明從（0.5μmol/L，24h）As2O3組開始，VEGF濃度即下降至(405.02±62.44)pg/ml(P<0.05)，相同處理時間下，以5.0μmol/LAs2O3組較其他濃度組下調(diào)VEGF作用的作用最為顯著。在相同As2O3濃度處理下，以72h As2O3組較其他時間組下調(diào)VEGF作用的幅度最為顯著。
　　結(jié)論：
　　（1）(0.5μmol/L-5.0μmol/L)的As2O3在(24h-72h)之間