三氧化二砷增強(qiáng)姜黃素抑制K562細(xì)胞生長和誘導(dǎo)凋亡的研究.pdf

1、目的：觀察姜黃素及三氧化二砷對K562細(xì)胞增殖及凋亡影響，以及兩者聯(lián)合應(yīng)用對K562細(xì)胞增殖及凋亡的作用，探討不同靶點藥物聯(lián)合對白血病細(xì)胞的作用。
　　 方法：采用四唑鹽(MTT)比色法檢測姜黃素及三氧化二砷對K562細(xì)胞增殖的影響，以及兩者聯(lián)合應(yīng)用對K562細(xì)胞增殖的影響；Annexin-V FITC/PI雙染流式細(xì)胞儀檢測姜黃素、三氧化二砷單用及聯(lián)合對K562細(xì)胞凋亡的影響。兩種藥物聯(lián)用后是否有協(xié)同作用可按金氏公式計算q值：

2、q=D1+2/(D1+D2-D1×D2)，D1+2是指兩藥聯(lián)合作用時的抑制率，D1，D2分別只單藥作用時的抑制率。當(dāng)q值大于1.15表示有協(xié)同作用，小于0.85表示拮抗作用，在0.85和1.15之間表示相加作用。
　　 結(jié)果：
　　 1.姜黃素和As2O3對K562細(xì)胞的生長抑制作用
　　 姜黃素終濃度為20.0μmol/L孵育48小時，K562細(xì)胞的生長抑制率為25.996±3.146％，姜黃素為0濃度時為對照

3、。姜黃素對K562細(xì)胞作用48h后IC50為71.61μmol/L。加入終濃度為8.0μmol/L三氧化二砷孵育48小時，K562細(xì)胞的生長抑制率為43.426±4.211％，三氧化二砷濃度為0時作對照。三氧化二砷對K562細(xì)胞作用48h后IC50為12.05μmol/L。結(jié)果顯示姜黃素和三氧化二砷對K562細(xì)胞生長均明顯的抑制作用。
　　 2.姜黃素和As2O3對K562細(xì)胞的生長抑制的時間依賴關(guān)系觀察
　　 終濃度為

4、40.0μmol/L姜黃素以及終濃度為8.0μmol/L三氧化二砷分別加入K56細(xì)胞培養(yǎng)中，孵育24、48小時，觀察藥物對K562細(xì)胞抑制的時間依賴關(guān)系。結(jié)果在加姜黃素組在孵育24、48小時，抑制率分別為13.996±3.847％和25.996±3.146％。三氧化二砷組孵育24、48小時，抑制率分別為24.426±3.942％和43.426±4.211％，可見隨孵育時間延長，姜黃素及三氧化二砷對K562細(xì)胞的生長抑制率增高。
　

5、　 3.姜黃素和As2O3對K562細(xì)胞的生長抑制的劑量依賴關(guān)系
　　 姜黃素終濃度分別為0、5.0μmol/L、10.0μmol/L、20.0μmol/L、40.0μmol/L，以及三氧化二砷終濃度分別為2.0μmol/L、4.0μmol/L、8.0μmol/L、16.0μmol/L，與K562細(xì)胞孵育48小時。分別觀察姜黃素和三氧化二砷濃度變化對K562細(xì)胞生長影響。結(jié)果見隨著姜黃素和三氧化二砷濃度增加，對K562細(xì)胞的抑

6、制率增高。
　　 4.三氧化二砷增強(qiáng)姜黃素對K562細(xì)胞的生長抑制作用
　　 不同濃度的姜黃素5.0-40.0μmol/ml與As2O32μmol/ml聯(lián)合作用于K562細(xì)胞，孵育48小時后觀察生長抑制率，測定As2O32對姜黃素作用的影響。結(jié)果：姜黃素聯(lián)合As2O3對K562的抑制作用明顯高于單藥處理組，且不同藥物濃度組的q值均大于1.15(p＜0.05)，提示兩藥聯(lián)合對K562均能產(chǎn)生協(xié)同抑制的作用。
　　

7、5.三氧化二砷增強(qiáng)姜黃素誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡
　　 在姜黃素濃度為5.0、10.0、20.0、40.0 umol/L時加三氧化二砷2.0umol/L作用于K562細(xì)胞48小時后，通過AnnexinV-FITC/PI法測定單藥及聯(lián)合后K562的凋亡率。在姜黃素0、5.0、10.0、20.0、40.0 umol/L時凋亡率分別為0.76％、6.84％、12.21％、22.5％、29.87％，加三氧化二砷2.0umol/L時，凋亡率均

8、有明顯的增高，兩兩比較差異有非常顯著性意義(q＞1.15，p＜0.01)。結(jié)果示三氧化二砷能增強(qiáng)姜黃素誘導(dǎo)K562凋亡的作用。
　　 通過Hoechst33258 DNA染色法觀察K562細(xì)胞凋亡，三氧化二砷(2.0umol/L)、姜黃素(20.0 umol/L)作用于K562細(xì)胞48小時后，經(jīng)Hoechst33258染色觀察，姜黃素、三氧化二砷、聯(lián)合作用組細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)出現(xiàn)凝聚、邊緣化，部分細(xì)胞核裂解為碎塊，出現(xiàn)凋亡小體。三