低氧誘導(dǎo)因子抑制劑對白血病K562-A02細(xì)胞VEGF和mdr1-P-gp表達(dá)及逆轉(zhuǎn)多藥耐藥的研究.pdf

1、目的：本研究探討低氧誘導(dǎo)因子抑制劑3-（5'-Hydroxymethyl-2'-furyl）-1-benzylindazole（YC-1）對人白血病耐阿霉素細(xì)胞K562/A02的血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelialgrowth factor，VEGF）和多藥耐藥基因1（multidrug resistance gene1，mdrl）/P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）表達(dá)影響，并探討其逆轉(zhuǎn)多藥耐藥

2、的可能機制，為白血病的治療提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　 方法：采用四甲基偶氮唑藍(lán)法（MTT）檢測不同濃度YC-1對K562/A02細(xì)胞和K562細(xì)胞增殖抑制效應(yīng)；MTT和流式細(xì)胞儀法（FCM）分別檢測0、5、10和20μ mol/L YC-1單獨或聯(lián)合1mg/L阿霉素（adfiamycin，ADM）作用K562/A02細(xì)胞48小時后細(xì)胞耐藥逆轉(zhuǎn)效應(yīng)和凋亡率及細(xì)胞內(nèi)阿霉素濃度；應(yīng)用DAPI染色觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)；半定量RT-PCR檢測

3、各組細(xì)胞低氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia inducible factor，HIF-1α）、mdrl和VEGF mRNA水平變化；Western blot檢測各組細(xì)胞HIF-1α、P-gp和VEGF蛋白表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：K562與K562/A02對阿霉素的IC50值分別為（1.56±0.07）mg/L和（42.98±3.15）mg/L，耐藥倍數(shù)為27.55倍。予5、10和20μ mol/L YC-1作用后，K562/A0

4、2細(xì)胞對阿霉素的耐藥倍數(shù)分別為24.63、16.38和10.71倍。0、5、10和20μ mol/L YC-1單獨處理K562/A02細(xì)胞48小時后，凋亡率分別為（1.9±0.9）％、（4.9±0.9）％、（5.8±1.1）％和（9.3±1.4）％，其中5μmol/L與10μmol/L組間無統(tǒng)計學(xué)差異（p=0.34），其余各組間均存在統(tǒng)計學(xué)差異（p<0.01）。0、5、10和20μ mol/L YC-1聯(lián)合1mg/L阿霉素處理K562/

5、A02細(xì)胞48小時后，凋亡率分別為（2.34±0.7）％、（8.2±1.2）％、（19.4±1.7）％和（34.54±2.4）％，各組間均存在統(tǒng)計學(xué)差異（p<0.01）；DAPI染色可見隨著YC-1濃度增加，細(xì)胞核逐漸呈現(xiàn)波紋狀或折縫樣，部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài)，或細(xì)胞核染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化，細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體。0、5、10和20μ mol/L YC-1分別聯(lián)合1mg/L阿霉素處理K562/A02細(xì)胞48小時后細(xì)胞內(nèi)阿霉素?zé)?/p>

6、光強度分別為232±33、1300±219、1961±240和3342±269，各組間均存在統(tǒng)計學(xué)差異（p<0.01）。隨著YC-1濃度增加，可見HIF-1α mRNA水平?jīng)]有明顯差異，mdrl和VEGF mRNA逐漸下調(diào)，HIF-1α、P-gp和VEGF蛋白均下調(diào)。
　　 結(jié)論：YC-1可以通過抑制HIF-1α蛋白表達(dá)，下調(diào)mdrl和VEGFmRNA水平及P-gp和VEGF蛋白水平，單獨應(yīng)用YC-1作用K562/A02細(xì)胞可以