谷氨酰胺對(duì)新生兒外周血單個(gè)核細(xì)胞免疫特性的影響.pdf

1、探討谷氨酰胺(Glutamine,GLN)對(duì)不同新生兒外周血單個(gè)核(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC)的增殖和不同階段的激活,以及對(duì)PMBC中T細(xì)胞亞群分化和自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)活性的影響.研究方法和內(nèi)容:分別對(duì)健康早產(chǎn)兒、健康足月兒和感染性疾病患兒的PBMC經(jīng)添加GLN(GLN組)或不添加GLN(非GLN組)培養(yǎng)后進(jìn)行以下研究:1、PBMC的增殖度:四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法(MTT

2、法)檢測(cè)經(jīng)T細(xì)胞絲裂原-植物血凝素(Phytohemagglutinin,PHA)刺激96小時(shí)后PBMC的增殖度;2、PBMC早期激活標(biāo)志IL-2mRNA的表達(dá):逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)經(jīng)PHA刺激48小時(shí)后PBMC中IL-2mRNA的表達(dá);3、PBMC晚期激活標(biāo)志CD25的表達(dá):流式細(xì)胞儀(Flow-cytometry,FCM)檢測(cè)經(jīng)T細(xì)胞絲裂原-刀豆蛋白(Concanavalin A,ConA)刺激66-72小時(shí)后P

3、BMC中CD25分子的表達(dá);4、T細(xì)胞亞群分化:FCM檢測(cè)經(jīng)ConA刺激66-72小時(shí)后PBMC中CD4、CD8T細(xì)胞亞群的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率(Positive expression cell rate,PECR);5、NK細(xì)胞活性:FCM檢測(cè)經(jīng)脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)和白介素-2(Interleukin-2,IL-2)刺激96小時(shí)后PBMC中表型為CD3-CD16+CD56+的成熟NK細(xì)胞陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率.1

4、、GLN能提高體外新生兒PBMC的增殖水平,同樣是體外新生兒細(xì)胞培養(yǎng)中增殖和存活必不可少的物質(zhì);2、GLN能增強(qiáng)體外新生兒PBMC的激活,可能有利于其免疫功能的發(fā)揮;3、GLN能促進(jìn)CD4+T細(xì)胞增殖,提高CD4+/CD8+比例,從而提示GLN可能對(duì)新生兒T細(xì)胞亞群的分化成熟有明顯促進(jìn)作用;4、GLN對(duì)感染患兒NK細(xì)胞的活性恢復(fù)有一定的促進(jìn)作用,提示在感染情況下GLN可減輕NK細(xì)胞功能抑制.總之,GLN能在一定程度上能促進(jìn)新生兒外周血單