蛋白激酶C在胰島素抵抗骨骼肌細胞中的作用.pdf

1、胰島素抵抗(Insulin Resistance，IR)是指外周靶組織對胰島素的敏感性和反應性降低，導致生理劑量的胰島素產(chǎn)生低于正常的生理效應，長期IR和高胰島素血癥會引發(fā)一系列病理狀態(tài)，如肥胖、尤其是內(nèi)臟肥胖、糖調(diào)節(jié)受損、T2DM、脂肪肝、高血壓、冠心病、脂質(zhì)代謝紊亂等。IR是葡萄糖耐量受損和T2DM的主要特征，而胰島素受體信號轉(zhuǎn)導缺陷是IR發(fā)生的主要原因。在體內(nèi)，胰島素主要通過IRS-1/PI3-K/PKB(Akt)信號途徑促進葡萄

2、糖轉(zhuǎn)運。蛋白激酶B(Protein Kinase B，PKB/Akt)位于磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol3-kinase，PI3-K)的下游，是P13-K受體蛋白激酶的主要靶點，PKB被PI3-K激活后發(fā)生磷酸化，激活的PKB可促進葡萄糖轉(zhuǎn)運因子-4(Glucose transport factor-4，Glut-4)的轉(zhuǎn)位和刺激葡萄糖的攝取，調(diào)節(jié)胰島素代謝反應，如調(diào)節(jié)糖原合成、糖酵解等[1]。
　　

3、 蛋白激酶C(Protein Kinase C，PKC)是細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導通路上的一個重要成員，它的表達及激活與IR和糖尿病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。體內(nèi)脂質(zhì)增加可通過PKC影響胰島素信號轉(zhuǎn)導通路，然而具體的作用機理還不是十分清楚。骨骼肌是胰島素刺激的葡萄糖攝取的主要靶組織，也是IR發(fā)生的主要部位。本研究從胰島素信號轉(zhuǎn)導途徑出發(fā)，探討棕櫚酸誘導骨骼肌細胞產(chǎn)生IR的分子機制及PKC在棕櫚酸誘導骨骼肌細胞IR中的作用。
　　 材料與方法:

4、
　　 出生3-5天SD大鼠的骨骼肌細胞DMEM培養(yǎng)基優(yōu)級胎牛血清胰蛋白酶棕櫚酸(Palmitic Acid，PA)羅格列酮生物合成人胰島素（諾和靈R）
　　 葡萄糖檢測試劑盒白屈萊紅堿(Chelerythrine Chloride，CC)α-sarcometric actin單克隆抗體羅丹明(TRITC)標記的小鼠抗大鼠二抗PKB多克隆抗體P-Ser473PKB多克隆抗體堿性磷酸酶(ALP)標記的羊抗兔二抗二氧化碳培養(yǎng)

5、箱倒置顯微鏡超低溫冷凍冰箱Western blotting全套設(shè)備ECL成像儀GraphPad Prism5軟件采用胰蛋白酶和Ⅰ膠原酶聯(lián)合消化、多次濾網(wǎng)過濾及差速貼壁法得到較高純度的骨骼肌細胞，免疫熒光方法鑒定原代大鼠骨骼肌細胞，PA作用細胞后，胰島素刺激15min，氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)法（GOD-POD法）檢測培養(yǎng)液中葡萄糖濃度。設(shè)立對照組、PA組、羅格列酮組（Rosiglitazone，Ros組），每組一分為二，胰島素刺激15mi

6、n前，分別加與不加PKC抑制劑CC作用1h，Western Blot方法檢測PKB蛋白及其磷酸化(P-Ser473 PKB)水平。
　　 結(jié)果:
　　 PA組P-Ser473PKB的表達顯著低于對照組和羅格列酮組。
　　 PA加CC組P-Ser473PKB表達與本組未加CC相比顯著升高。
　　 對照組、PA組及羅格列酮組的PKB蛋白水平無明顯變化。
　　 結(jié)論:
　　 一定濃度的PA可誘導