TLR4在脂肪酸誘導(dǎo)人骨骼肌細(xì)胞胰島素抵抗中作用的研究.pdf

1、研究目的：
　　代謝性疾病是一個(gè)世界范圍的問(wèn)題，嚴(yán)重地影響著人民的生活質(zhì)量。代謝性疾病的發(fā)生與長(zhǎng)期能量攝入正平衡引起的肥胖有關(guān)。肥胖在導(dǎo)致其他代謝性疾病時(shí)，一個(gè)重要的環(huán)節(jié)是全身胰島素抵抗的形成。因此，胰島素抵抗是代謝性疾病形成的關(guān)鍵。脂肪組織等形成胰島素抵抗的主要誘導(dǎo)因素是游離脂肪酸增加；游離脂肪酸的增加則與長(zhǎng)期能量正平衡導(dǎo)致的肥胖有關(guān)。肥胖實(shí)質(zhì)是一種低度炎癥反應(yīng)。但是肥胖致炎癥反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制尚不明確。人體的免疫系統(tǒng)是受到精密調(diào)控

2、的，炎癥反應(yīng)的過(guò)程往往有一個(gè)或幾個(gè)關(guān)鍵調(diào)節(jié)點(diǎn)，已有研究顯示TLR4可能是肥胖致低度炎癥反應(yīng)的一個(gè)關(guān)鍵調(diào)節(jié)點(diǎn)。TLR4在炎癥因子基因啟動(dòng)和轉(zhuǎn)錄調(diào)控過(guò)程中占有重要的地位，同樣在肥胖所致炎癥反應(yīng)中也可能扮演重要角色，但是以上推論并沒(méi)有直接證據(jù)支持。
　　本實(shí)驗(yàn)選用人骨骼肌細(xì)胞作為對(duì)象，研究TLR4的表達(dá)水平對(duì)炎癥因子活性和胰島素抵抗的影響，以及脂肪酸對(duì)TLR4活性及其下游炎癥因子的影響。
　　研究方法：
　　1.棕櫚酸和DH

3、A(100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L)干預(yù)人骨骼肌細(xì)胞4h，8h，12h，24h后，用MTT法測(cè)定其對(duì)骨骼肌細(xì)胞增殖的影響。棕櫚酸和DHA干預(yù)人骨骼肌細(xì)胞24h后，用葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中葡萄糖含量；用WesternBlot法檢測(cè)TLR4，MyD88，CRP的表達(dá)；Real-timePCR法檢測(cè)TLR4，MyD88，CRP，TNF-α，IL-6mRNA的表達(dá)。
　　2.用LPS

4、和PMB分別作用人骨骼肌細(xì)胞24h，用WesternBlot法檢測(cè)TLR4，MyD88的表達(dá)；Real-timePCR法檢測(cè)TLR4，MyD88，CRP，TNF-α，IL-6mRNA的表達(dá)；用葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中的葡萄糖含量。
　　研究結(jié)果：
　　1.棕櫚酸作用于人骨骼肌細(xì)胞，與對(duì)照組比較，其葡萄糖攝取能力明顯下降（P<0.05），TLR4及其下游炎癥因子TNF-α，IL-6，CRP表達(dá)均明顯增

5、高（P<0.05）;但TLR4下游適配分子MyD88mRNA顯著增高（P<0.05），但蛋白水平?jīng)]有明顯差異(P>0.05）。相反，DHA作用的人骨骼肌細(xì)胞均沒(méi)有明顯變化。
　　2.TLR4高表達(dá)組的炎癥因子TNF-α，IL-6，CRP及MyD88的表達(dá)明顯高于對(duì)照組（P<0.05），其葡萄糖攝取能力明顯下降（P<0.05）；TLR4低表達(dá)組的炎癥因子TNF-α，IL-6，CRP及MyD88的表達(dá)明顯低于對(duì)照組（P<0.05）。，