魚藤組織培養(yǎng)與魚藤素提取分離的研究.pdf

1、魚藤素是植物中最常見的魚藤酮類化合物之一,近年發(fā)現(xiàn)其具有強(qiáng)抗癌活性,在預(yù)防及治療肺癌兩方面均具有潛在的應(yīng)用前景。本研究應(yīng)用生物技術(shù)方法對(duì)魚藤的嫩莖、葉進(jìn)行組織培養(yǎng),并從愈傷組織中提取和分離出魚藤素,同時(shí)對(duì)魚藤素的還原反應(yīng)進(jìn)行初步探討。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　 1.魚藤的組織培養(yǎng)條件優(yōu)化
　　 比較0.1％氯化汞和2％次氯酸鈉不同滅菌時(shí)間對(duì)組培的影響,并探討不同pH值和激素濃度組合對(duì)魚藤莖、葉組織培養(yǎng)的影響。結(jié)果表明:魚藤莖、

2、葉組織培養(yǎng)適宜條件為:采用2％次氯酸鈉滅菌外植體14min,培養(yǎng)基的pH值為6.0,激素濃度為2,4-D2.0mg/mL、6-BA1.0mg/mL。此時(shí)組織培養(yǎng)的死亡率和污染率均不高于16％;愈傷組織的誘導(dǎo)率最高95％;莖、葉愈傷組織收獲量也最多,分別為3.9522g、3.5944g。
　　 2.魚藤素的提取條件優(yōu)化
　　 采用超聲波輔助浸提、振蕩提取、冷凍濃縮在貢丸水煮液回收中的應(yīng)用三種方法從愈傷組織中提取魚藤素,并與

3、魚藤各個(gè)部位進(jìn)行比較。結(jié)果表明:在相同條件下,提取魚藤素的適宜方法為超聲波輔助浸提5min,魚藤素提取率為10.31％。組培到60d時(shí),愈傷組織中魚藤素含量最高為51.40％;提取率比較結(jié)果為根＞根瘤＞愈傷組織＞葉＞莖,根的提取率最高為9.29％,愈傷組織的提取率為8.23％。
　　 3.魚藤素的分離條件優(yōu)化
　　 采用硅膠柱層析(流動(dòng)相為石油醚.乙酸乙酯梯度洗脫)和薄層層析分離,應(yīng)用HPLC(反相C18柱、流動(dòng)相甲醇-

4、水(66:34)、流速0.5ml/min、柱溫30℃)檢測。結(jié)果顯示:當(dāng)硅膠柱層析以流動(dòng)相為石油醚:乙酸乙酯=5:1時(shí),魚藤素分離效果好,含量為96.76％:薄層層析以展開劑為丙酮:氯仿:石油醚=1:2:7,當(dāng)Rf2=0.31時(shí),能夠較好的分離出魚藤素,魚藤素含量為93.33％。
　　 4.還原衍生條件的探討
　　 試樣溶解于甲醇中,與硼氫化鈉發(fā)生還原反應(yīng),通過高效液相色譜法檢測分析。實(shí)驗(yàn)表明:在氫氧化鈉條件下,加熱到8