丹參組織培養(yǎng)及原生質(zhì)體分離的研究.pdf

1、丹參又為血參、紫丹參，是我國(guó)重要的傳統(tǒng)中藥材。本文選用丹參莖節(jié)段為外植體建立丹參的無(wú)菌體系，以丹參無(wú)菌苗的幼嫩葉片為外植體，通過(guò)研究植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的種類及濃度對(duì)丹參愈傷組織誘導(dǎo)、愈傷組織分化為芽及無(wú)菌苗生根的影響，建立丹參的離體再生體系。同時(shí)，以丹參幼嫩葉片和愈傷組織為外植體，研究了原生質(zhì)體分離的材料、不同酶液濃度、酶解時(shí)間、滲透壓濃度、預(yù)處理方法對(duì)丹參原生質(zhì)體游離的產(chǎn)量及活力的影響，及原生質(zhì)體的培養(yǎng)條件，從而初步建立丹參原生質(zhì)體的培養(yǎng)

2、體系。為解決丹參供求矛盾、實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)、培養(yǎng)高產(chǎn)高效丹參植株提供借鑒，研究結(jié)果如下：
　　1.丹參無(wú)菌體系的建立：丹參莖段的最佳滅菌方法是75％乙醇溶液表面消毒1min，無(wú)菌水沖洗5次，0.1%的升汞溶液處理10min，無(wú)菌水沖洗5次；
　　2.丹參無(wú)菌苗葉片的愈傷組織最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基是：MS+2,4-D0.5mg/L+6-BA1.0 mg/L；
　　3.丹參愈傷組織分化為芽的最佳培養(yǎng)基是：MS+0.5mg/L6-BA

3、+0.1mg/L NAA；
　　4.根的誘導(dǎo)：（1）丹參試管苗生根的最佳基本培養(yǎng)基是1/2 MS，每株試管苗平均生根率為57.41%，平均根數(shù)為2.07條；（2）IBA的生根率及根的長(zhǎng)勢(shì)整體比NAA效果好，IBA濃度為0.2 mg/L～0.6 mg/L時(shí)丹參試管苗的生根率差異不顯著，IBA濃度較高時(shí)根部愈傷化嚴(yán)重，最佳生根培養(yǎng)基是：1/2 MS+0.2 mg/L IBA；
　　5.丹參無(wú)菌苗葉片利于原生質(zhì)體的分離，原生質(zhì)體產(chǎn)

4、量為4.57×105個(gè)/g，原生質(zhì)體活力為63.63%；
　　6.丹參葉片原生質(zhì)體分離的最佳酶液組合是：2.0%纖維素酶+0.5%果膠酶+0.5%半纖維素酶；
　　7.黑暗振蕩酶解12 h是丹參葉片原生質(zhì)體分離的最佳酶解時(shí)間；
　　8.甘露醇濃度為0.6 mol/L時(shí)，原生質(zhì)體內(nèi)外壓力較為平衡，是丹參葉片釋放原生質(zhì)體適宜的滲透壓濃度；
　　9.質(zhì)壁分離1 h比對(duì)照組原生質(zhì)體產(chǎn)量提高了37.49%；
　　10