葛根素對魚藤酮誘導帕金森模型的保護作用及其機制.pdf

1、目的：帕金森病是一種中老年人常見的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病,以多巴胺能神經(jīng)元進行性丟失為病理特征。氧化應激作為在帕金森病重要的發(fā)病機制之一,會造成多巴胺能神經(jīng)元受損死亡。葛根素為中藥葛根中提取的一種活性成分,具有抗氧化及抑制神經(jīng)細胞凋亡的作用,是否可用于保護多巴胺能神經(jīng)元值得探索。因此,本實驗旨在觀察葛根素對神經(jīng)元的保護性作用及其機制,從而為帕金森病的修飾和保護治療提供依據(jù)。
　　方法：
　?、寮毎Ｐ?魚藤酮(Rot,Roteno

2、ne)誘導SH-SY5Y細胞的PD模型。
　?、費TT(噻唑藍)比色法:實驗分組為空白對照組,魚藤酮(Rot)模型組和不同濃度的葛根素(PUR,Puerarin)藥物處理組(10μM,50μM,100μM,150μM濃度組)。葛根素預處理24小時后,魚藤酮再處理24小時。MTT法檢測細胞存活率。
　?、诜纸M同上,DCFH-DA按照試劑盒實驗步驟進行細胞熒光染色,分別采用流式細胞儀檢測(FCM,flowcytometry)和普

3、通熒光顯微鏡觀察細胞內(nèi)ROS
　　③分組同上,AnnexinV-FITC試劑盒進行細胞凋亡檢測。
　　㈡動物模型:
　?、俨捎昧Ⅲw定向儀(stereotaxicapparatus)注射魚藤酮(6μg/μl)于Sprague–Dawley(SD)大鼠右側(cè)黑質(zhì)致密部(substantianigracompactpart,SNc)和腹側(cè)被蓋區(qū)(ventraltegmentalarea,VTA),分為四個處理組:空白對照組(D

4、MSO),Rot組,(Rot+PUR50μM)組,(Rot+PUR100μM)組,其中葛根素處理組于第三天APO旋轉(zhuǎn)實驗評定后,連續(xù)注射7天。
　?、诜炙闹芙o予SD大鼠皮下注射阿樸嗎啡(apomorphine,APO)誘導旋轉(zhuǎn)。
　?、厶幩来笫蠛?免疫熒光染色觀察黑質(zhì)區(qū)酪氨酸羥化酶(tyrosinehydroxylase,TH),多巴胺轉(zhuǎn)運體(dopaminetransporter,DAT),囊泡單胺轉(zhuǎn)運體2(vesicul

5、armonoaminetransporter2,VMAT2)以及泛素(Ubiquitin,Ub)免疫活性變化。
　　結(jié)果：
　?、寮毎Ｐ?
　　與單用魚藤酮的模型組相比,(Rot+PUR)處理組(PUR10μM,100μM,150μM)細胞存活率有顯著升高(P<0.05),(ROT+PUR10μM,50μM)組的ROS(reactiveoxygenspecies)水平下降(P<0.05),(ROT+PUR10μM)組

6、凋亡率下降(P<0.05)。
　?、鎰游锬Ｐ?
　　①APO旋轉(zhuǎn)行為學:與立體定向注射魚藤酮后的模型組大鼠相比,魚藤酮造模后給予腹腔注射葛根素(50μM,100μM)組的大鼠旋轉(zhuǎn)圈數(shù)在第一周和第二周評定時有明顯減少(P<0.05)。
　?、诿庖邿晒?與單用魚藤酮組相比,大鼠黑質(zhì)中(Rot+PUR50μM,100μM)組TH,DAT,VMAT2熒光強度增加(P<0.05),Ub熒光強度降低(P<0.05)。
　　結(jié)