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文檔簡介
1、心肌缺血再灌注損傷是急性心肌梗塞再通后出現(xiàn)的病理生理過程。近些年,隨著急性心梗各種血管開通技術(shù)的發(fā)展,人們對缺血再灌注損傷越來越重視,并做了大量的基礎(chǔ)及臨床研究。尋找有效地防治方法是目前面臨的難題。本實驗通過制作在體大鼠心梗模型進(jìn)行模擬臨床急性心肌梗死再灌注治療,并通過觀察心律失常的改變及心肌組織丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性反映心肌受損的程度
2、,并分別檢測心肌組織NOS同功酶iNOS、cNOS。應(yīng)用阿魏酸鈉(Sodium ferulate,SF)干預(yù),探討NOS系統(tǒng)在心肌缺血-再灌注損傷中的作用及SF對NOS系統(tǒng)的影響,為SF的心肌保護(hù)作用提供理論依據(jù),為臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)藥理資料。 實驗材料和方法: 1.實驗動物及分組:采用3月齡健康雄性Wistar大鼠40只,體重180-250g,由中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。適應(yīng)性喂養(yǎng)2天后心電圖正常者作為實驗對象。動物
3、隨機(jī)分為4組:假手術(shù)組、缺血再灌注組(MI/R)、阿魏酸鈉(SF)小劑量組按按20mg/kg給藥、阿魏酸鈉(SF)大劑量組按20mg/kg給藥。制作缺血再灌注模型用10%水合氯醛(0.3ml/kg)腹腔注射麻醉,氣管插管,接微型呼吸機(jī)(頻率50次/min,潮氣量1.5L/100mg),四肢皮下插入針形電極記錄心電圖,并接心電監(jiān)護(hù)儀監(jiān)測心電變化。在胸骨左緣3.4肋間開胸,開瞼器拉開肋骨,暴露心臟,以動脈圓錐與左心耳之間的左冠狀靜脈為標(biāo)志,
4、在冠狀動脈左前降支(LAD)起始0.2cm處穿線,結(jié)扎之前在預(yù)結(jié)扎的冠狀動脈前降支處放置一根約0.5cm長直徑1.5mm的乳膠管,結(jié)扎左冠狀動脈前降支結(jié)扎10min,于結(jié)扎后5分鐘左心室心腔注射給藥。剪開結(jié)扎線即可實現(xiàn)再灌注,再灌注30min。結(jié)扎成功標(biāo)準(zhǔn):心電圖Ⅱ?qū)?lián)ST段抬高、增寬。 2.測定指標(biāo)的方法:實驗開始時記錄心律失常發(fā)生率及心律失常持續(xù)時間。實驗完畢取心肌組織,制備10%組織勻漿應(yīng)用硫代巴比妥酸比色法(TBA)測定
5、丙二醛(MDA)含量及黃嘌呤氧化法測定SOD活性及NOS測定試劑盒進(jìn)行測定iNOS、cNOS活性,蛋白濃度測定采用雙縮脲法。 3.實驗儀器和試劑:心電圖儀;多功能生理記錄儀;小動物呼吸機(jī);壓力傳感器;冷光源;手術(shù)器械;天平;-20℃冰箱;-70℃度冰箱;低溫離心機(jī);組織勻漿機(jī);酶標(biāo)儀;阿魏酸鈉注射液由巴里莫爾制藥(通化)有限公司提供;丙二醛試劑盒、超氧化物歧化酶試劑盒購自南京建成生物工程研究所,TU21901雙光束紫外可見分光光
6、度計;數(shù)顯恒溫水浴鍋;NOS雙縮脲試劑盒購于南京建成生物工程研究所。 4.統(tǒng)計學(xué)處理:應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計軟件,數(shù)據(jù)以(x<'->±s)表示,組間的差異顯著性比較使用獨立樣本t檢驗。 實驗結(jié)果: MI/R組很快出現(xiàn)嚴(yán)重心律失常VT、VF發(fā)生率為100%;SF組心律失常出現(xiàn)的時間明顯延遲,心律失常持續(xù)時間明顯縮短.VT、VF發(fā)生率顯著減少。心肌組織MDA含量, SOD活性測定結(jié)果顯示,假手術(shù)組MDA含量最低為1
7、.553±0.88nmol/mgprot,而MI/R組MDA含量明顯升高,為2.982±1.131nmol/mgprot,經(jīng)SF干預(yù)后,MDA含量分別下降為2.400±0.726nmol/mgprot(20mg/kg組)和1.986±1.052nmol/mgprot(40mg/kg組);其中SF小劑量組與MI/R組相比存在顯著性差異(p<0.05);SF大劑量組與缺血再灌注組相比存在更顯著性差異(p<0.01)。SOD活性結(jié)果正好相反,
8、假手術(shù)組SOD活性最高為191.125±11.245U/mgprot,MI/R組SOD活性最低為136.956±7.644U/mgprot;而SF組則分別恢復(fù)到141087±6537U/mgprot(20mg/kg組)和152301±7261U/mgprot(40mg/kg組)。假手術(shù)組與MI/R組、SF小劑量組相比SOD活性存在顯著性差異(p<0.05);假手術(shù)組與SF大劑量組相比SOD活性無顯著性差異;SF小劑量組與MI/R組比較S
9、OD活性有上升趨勢但無統(tǒng)計學(xué)差異;SF大劑量與MI/R組相比有顯著性差異(p<0.05);SF大劑量組與SF小劑量組比較SOD活性有上升趨勢相比較有顯著性差異(P<0.01)。cNOS、iNOS活性比較結(jié)果顯示,假手術(shù)組cNOS活性最高為0.714±0.030 KU/gprot,MI/R組cNOS活性最低為0.584±0.125KU/gprot,而SF組則分別恢復(fù)到0.649±0.109KU/gprot(20mg/kg組)和0.655±
10、0.109 KU/gprot(40mg/kg組),假手術(shù)組與MI/R組比較cNOS活性存在顯著性差異(p<0.01),SF小劑量組cNOS活性高于MI/R組相比較有顯著性差異(p<0.05);SF大劑量組cNOS活性高于MI/R組相比較有顯著性差異(p<0.05);SF預(yù)處理組cNOS活性略低于假手術(shù)組,但無顯著性差異;假手術(shù)組iNOS活性最低為0.176±0.030 KU/gprot,而MI/R組iNOS活性明顯升高為0317±011
11、5KU/gprot,兩組相比存在顯著性差異(p<0.01);經(jīng)SF干預(yù)后,iNOS活性分別下降為0.224±0.116 KU/gprot(20mg/kg組)和0.222±0.123 KU/gprot(40mg/kg組)。其中SF小劑量組與MI/R組iNOS活性相比存在顯著性差異(p<0.01),SF大劑量組與缺血再灌注組iNOS活性相比存在顯著性差異(p<0.01)。SF預(yù)處理組iNOS活性略高于假手術(shù)組,但無顯著性差異。各項指標(biāo)SF大
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