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文檔簡介
1、背景:腦血管病是人類的常見病和多發(fā)病,其以較高的發(fā)病率、致殘率和病死率成為當(dāng)前嚴(yán)重威脅人類健康的一類重要疾病,其中以缺血性腦血管病為最常見,但由于缺血后原發(fā)性和繼發(fā)性損傷機(jī)制尚未完全明了,所以它一直是各國研究的重點(diǎn)和難題。目前,對于腦缺血/再灌注損傷機(jī)制的研究主要集中在氧自由基、興奮性氨基酸、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、線粒體損傷、炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡等方面,其中,再灌注時的炎癥反應(yīng)促進(jìn)了繼發(fā)性腦損傷,是腦缺血/再灌注損傷的主要原因之一。
一
2、氧化氮(nitricoxide,NO)是普遍存在于脊椎動物各種細(xì)胞中的一種生物介質(zhì),是細(xì)胞間信息傳遞的重要調(diào)節(jié)因子,它作為第二信使和神經(jīng)遞質(zhì)有著各種不同的功能。生理狀態(tài)下,一氧化氮(NO)作為一種可彌散的神經(jīng)介質(zhì)或信使物質(zhì)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中起著多方面重要作用。同時NO也是一種自由基和細(xì)胞毒性物質(zhì)。有研究表明NO參與了CNS中神經(jīng)元的缺血缺氧性損害過程。NO參與機(jī)體生理及病理過程,對疾病發(fā)生及發(fā)展的影響一直是醫(yī)學(xué)界關(guān)注的焦點(diǎn)。由于
3、NO半衰期極短,在組織中難于直接測量,它的作用與一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,NOS)水平密切相關(guān)。NADPH-d酶組織化學(xué)技術(shù)可簡便而可靠地標(biāo)記NOS神經(jīng)元。在大鼠的大腦皮質(zhì)、海馬及紋狀體等區(qū)域中,含nNOS的神經(jīng)元占該區(qū)域所有細(xì)胞的1%~2%,它們散在性地分布在整個區(qū)域。
紅景天為景天科屬多年生草本或亞灌木植物,紅景天生長環(huán)境極其惡劣,缺氧、低溫干燥、狂風(fēng)、強(qiáng)紫外線照射、晝夜溫差大,故其已從遺傳上適
4、應(yīng)高寒多變的惡劣環(huán)境,具有很強(qiáng)的生命力和特殊的適應(yīng)性。是珍稀藥用植物之一,被譽(yù)“高原人參”。紅景天可全草入藥,在我國古代就得到廣泛應(yīng)用,在《本草綱目》《神農(nóng)本草經(jīng)》等醫(yī)書中均有記載,認(rèn)為紅景天具有“祛邪惡氣,補(bǔ)諸不足”之功。紅景天化學(xué)成分研究,國內(nèi)外進(jìn)行化學(xué)成分研究及成分預(yù)測試的品種約20個,紅景天的藥理實(shí)驗(yàn)研究表明,紅景天提取物或其有效成分具有抗衰老、抗疲勞、抗腫瘤、抗病毒、抗輻射以及對神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)的顯著作用[4]。
5、
目的:在低氧環(huán)境下研究紅景天對大鼠腦缺血的神經(jīng)保保護(hù)作用,為其治療腦缺血提供藥理依據(jù)。
方法:在亞高原(海拔2200米)采用紅景天給予灌胃(治療組),生理鹽水給于灌胃(對照組),采用正常飼養(yǎng)(正常組)。在高原(海拔3600米)采用紅景天給予灌胃(治療組),生理鹽水給于灌胃(對照組),采用正常飼養(yǎng)(正常組)。
1、亞高原和高原各對照組(n=6)每日給2ml/只的生理鹽水,亞高原和高原各治療組(n=6)每天灌
6、胃相同劑量紅景天制劑2ml/只,連續(xù)灌注30天,采用常壓密閉缺氧,將大鼠放入1100ML廣口瓶內(nèi),旋緊瓶塞,并涂以凡士林密封,與對照組相比,以實(shí)驗(yàn)動物大鼠從缺氧到死亡過程中有煩躁、紫紺、呼吸急促和抽搐等癥狀,以大鼠抽搐掙扎后突然癱軟并停止呼吸為死亡標(biāo)準(zhǔn)。記錄大鼠存活時間。
2、亞高原和高原各治療組大鼠(n=10)每天灌胃相同劑量紅景天制劑2ml/只,連續(xù)灌胃30天后,亞高原和高原各正常組(n=10)正常飼養(yǎng)30天,亞高原和高原
7、各對照組(n=10)每日給同量的生理鹽水,造模30天后應(yīng)用二血管阻塞法(2-VO)建立模型,具體操作方法如下:大鼠稱重,用10%的水合氯醛(0.7mL/100g)腹腔麻醉大鼠后,仰臥位固定于手術(shù)臺上,頸部剪毛,碘伏消毒,正中矢狀位依次切開皮膚、皮下組織和頸闊肌,分開胸鎖乳突肌和胸骨舌骨肌,分離、顯露兩側(cè)頸總動脈(commoncarotidarte,CCA),并用動脈夾夾閉,1小時后解除動脈夾,經(jīng)左心室插管灌注。生理鹽水250ml(28℃
8、)快速灌注至肝臟顏色為蒼白后,再用4%多聚甲醛固定液200ml(4℃)緩慢灌注,持續(xù)40min,取腦在上述固定液中固定2-4小時后移入20%蔗糖多聚甲醛溶液中4℃過夜至組織沉底。在操作過程中保持恒溫,對照組手術(shù)過程與治療組一致(n=10),正常組(n=10)正常飼養(yǎng)30天,未做任何處理。采用HE染色和尼氏染色觀察腦組織的形態(tài)學(xué)變化;NADPH-d組織化學(xué)染色方法標(biāo)記NOS,并進(jìn)行定量分析。
結(jié)果:
1.紅景天能明顯延
9、長大鼠在密閉缺氧環(huán)境下的存活時間。
大鼠從缺氧到死亡過程中有煩躁、紫紺、呼吸急促和抽搐等癥狀,以大鼠抽搐掙扎后突然癱軟并停止呼吸為死亡標(biāo)準(zhǔn)。亞高原組、高原組的存活時間(分鐘)分別是:亞高原(海拔2200米)藥物組為24.53,對照組為22.31;高原(海拔3600米)藥物組18.01,對照組15.66。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明紅景天能明顯延長大鼠在密閉缺氧環(huán)境下的存活時間。
2.在低氧環(huán)境下紅景天對大鼠腦缺血的神經(jīng)細(xì)胞有保護(hù)作
10、用。
2.1、NISSL染色結(jié)果正常新皮質(zhì)細(xì)胞排列整齊,形態(tài)完整,軸突較長而完整,3、5、6層,細(xì)胞大而圓,尼氏體顏色較深。對照組新皮質(zhì)3、5、6層細(xì)胞排列紊亂,形態(tài)完整的錐體細(xì)胞較少,已失去正常的細(xì)胞排列方式,細(xì)胞體積變小,胞核變形呈三角形,細(xì)胞皺縮,結(jié)構(gòu)不清,尼氏體淡染,且這種改變隨海拔的增高改變越明顯。治療組細(xì)胞形態(tài)基本正常,存在部分細(xì)胞排列紊亂的情況。有少許細(xì)胞中有棕色顆粒,
2.2、HE染色結(jié)果正常新皮質(zhì)細(xì)
11、胞層次清楚,細(xì)胞形態(tài)正常,排列整齊、分布均勻、形態(tài)完整、胞漿分布均勻、呈均勻鮮亮紅色、胞核呈圓形或橢圓形,有完整的核膜和清晰的核仁,呈鮮亮藍(lán)色;對照組新皮質(zhì)組織疏松而水腫明顯,殘存細(xì)胞多無完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu),空泡樣變明顯,細(xì)胞層次不清,體積變小,胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡;高海拔區(qū)缺血組大腦皮質(zhì)深部組織疏松而水腫明顯加重,分布不均勻,細(xì)胞固縮呈三角形,胞漿嗜伊紅,細(xì)胞核固縮深染,核仁消失。細(xì)胞周圍及間隙增寬,水腫明顯。治療組新皮質(zhì)組織水腫明顯好轉(zhuǎn),細(xì)胞
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