紅景天對大鼠腦缺血損傷的神經(jīng)保護(hù)作用.pdf

1、背景：腦血管病是人類的常見病和多發(fā)病，其以較高的發(fā)病率、致殘率和病死率成為當(dāng)前嚴(yán)重威脅人類健康的一類重要疾病，其中以缺血性腦血管病為最常見，但由于缺血后原發(fā)性和繼發(fā)性損傷機(jī)制尚未完全明了，所以它一直是各國研究的重點(diǎn)和難題。目前，對于腦缺血／再灌注損傷機(jī)制的研究主要集中在氧自由基、興奮性氨基酸、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、線粒體損傷、炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡等方面，其中，再灌注時的炎癥反應(yīng)促進(jìn)了繼發(fā)性腦損傷，是腦缺血／再灌注損傷的主要原因之一。
　　一

2、氧化氮(nitricoxide,NO)是普遍存在于脊椎動物各種細(xì)胞中的一種生物介質(zhì)，是細(xì)胞間信息傳遞的重要調(diào)節(jié)因子，它作為第二信使和神經(jīng)遞質(zhì)有著各種不同的功能。生理狀態(tài)下,一氧化氮(NO)作為一種可彌散的神經(jīng)介質(zhì)或信使物質(zhì)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中起著多方面重要作用。同時NO也是一種自由基和細(xì)胞毒性物質(zhì)。有研究表明NO參與了CNS中神經(jīng)元的缺血缺氧性損害過程。NO參與機(jī)體生理及病理過程，對疾病發(fā)生及發(fā)展的影響一直是醫(yī)學(xué)界關(guān)注的焦點(diǎn)。由于

3、NO半衰期極短，在組織中難于直接測量，它的作用與一氧化氮合酶（nitricoxidesynthase，NOS）水平密切相關(guān)。NADPH-d酶組織化學(xué)技術(shù)可簡便而可靠地標(biāo)記NOS神經(jīng)元。在大鼠的大腦皮質(zhì)、海馬及紋狀體等區(qū)域中，含nNOS的神經(jīng)元占該區(qū)域所有細(xì)胞的1％～2%，它們散在性地分布在整個區(qū)域。
　　紅景天為景天科屬多年生草本或亞灌木植物，紅景天生長環(huán)境極其惡劣,缺氧、低溫干燥、狂風(fēng)、強(qiáng)紫外線照射、晝夜溫差大,故其已從遺傳上適

4、應(yīng)高寒多變的惡劣環(huán)境,具有很強(qiáng)的生命力和特殊的適應(yīng)性。是珍稀藥用植物之一，被譽(yù)“高原人參”。紅景天可全草入藥，在我國古代就得到廣泛應(yīng)用，在《本草綱目》《神農(nóng)本草經(jīng)》等醫(yī)書中均有記載，認(rèn)為紅景天具有“祛邪惡氣，補(bǔ)諸不足”之功。紅景天化學(xué)成分研究，國內(nèi)外進(jìn)行化學(xué)成分研究及成分預(yù)測試的品種約20個,紅景天的藥理實(shí)驗(yàn)研究表明,紅景天提取物或其有效成分具有抗衰老、抗疲勞、抗腫瘤、抗病毒、抗輻射以及對神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)的顯著作用[4]。

5、
　　目的:在低氧環(huán)境下研究紅景天對大鼠腦缺血的神經(jīng)保保護(hù)作用，為其治療腦缺血提供藥理依據(jù)。
　　方法:在亞高原（海拔2200米）采用紅景天給予灌胃（治療組），生理鹽水給于灌胃（對照組）,采用正常飼養(yǎng)(正常組)。在高原（海拔3600米）采用紅景天給予灌胃（治療組），生理鹽水給于灌胃（對照組）,采用正常飼養(yǎng)(正常組)。
　　1、亞高原和高原各對照組（n=6）每日給2ml/只的生理鹽水，亞高原和高原各治療組（n=6）每天灌

6、胃相同劑量紅景天制劑2ml/只，連續(xù)灌注30天，采用常壓密閉缺氧，將大鼠放入1100ML廣口瓶內(nèi)，旋緊瓶塞，并涂以凡士林密封，與對照組相比，以實(shí)驗(yàn)動物大鼠從缺氧到死亡過程中有煩躁、紫紺、呼吸急促和抽搐等癥狀，以大鼠抽搐掙扎后突然癱軟并停止呼吸為死亡標(biāo)準(zhǔn)。記錄大鼠存活時間。
　　2、亞高原和高原各治療組大鼠（n=10）每天灌胃相同劑量紅景天制劑2ml/只，連續(xù)灌胃30天后，亞高原和高原各正常組（n=10）正常飼養(yǎng)30天,亞高原和高原

7、各對照組（n=10）每日給同量的生理鹽水，造模30天后應(yīng)用二血管阻塞法（2－VO）建立模型，具體操作方法如下：大鼠稱重，用10％的水合氯醛(0.7mL／100g)腹腔麻醉大鼠后，仰臥位固定于手術(shù)臺上，頸部剪毛，碘伏消毒，正中矢狀位依次切開皮膚、皮下組織和頸闊肌，分開胸鎖乳突肌和胸骨舌骨肌，分離、顯露兩側(cè)頸總動脈(commoncarotidarte，CCA)，并用動脈夾夾閉，1小時后解除動脈夾，經(jīng)左心室插管灌注。生理鹽水250ml（28℃

8、）快速灌注至肝臟顏色為蒼白后，再用4％多聚甲醛固定液200ml（4℃）緩慢灌注，持續(xù)40min，取腦在上述固定液中固定2-4小時后移入20％蔗糖多聚甲醛溶液中4℃過夜至組織沉底。在操作過程中保持恒溫，對照組手術(shù)過程與治療組一致(n=10)，正常組(n=10)正常飼養(yǎng)30天，未做任何處理。采用HE染色和尼氏染色觀察腦組織的形態(tài)學(xué)變化；NADPH-d組織化學(xué)染色方法標(biāo)記NOS，并進(jìn)行定量分析。
　　結(jié)果:
　　1．紅景天能明顯延

9、長大鼠在密閉缺氧環(huán)境下的存活時間。
　　大鼠從缺氧到死亡過程中有煩躁、紫紺、呼吸急促和抽搐等癥狀，以大鼠抽搐掙扎后突然癱軟并停止呼吸為死亡標(biāo)準(zhǔn)。亞高原組、高原組的存活時間（分鐘）分別是：亞高原（海拔2200米）藥物組為24.53，對照組為22.31；高原（海拔3600米）藥物組18.01，對照組15.66。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明紅景天能明顯延長大鼠在密閉缺氧環(huán)境下的存活時間。
　　2．在低氧環(huán)境下紅景天對大鼠腦缺血的神經(jīng)細(xì)胞有保護(hù)作

10、用。
　　2.1、NISSL染色結(jié)果正常新皮質(zhì)細(xì)胞排列整齊，形態(tài)完整，軸突較長而完整，3、5、6層，細(xì)胞大而圓，尼氏體顏色較深。對照組新皮質(zhì)3、5、6層細(xì)胞排列紊亂，形態(tài)完整的錐體細(xì)胞較少，已失去正常的細(xì)胞排列方式，細(xì)胞體積變小，胞核變形呈三角形，細(xì)胞皺縮，結(jié)構(gòu)不清，尼氏體淡染，且這種改變隨海拔的增高改變越明顯。治療組細(xì)胞形態(tài)基本正常，存在部分細(xì)胞排列紊亂的情況。有少許細(xì)胞中有棕色顆粒，
　　2.2、HE染色結(jié)果正常新皮質(zhì)細(xì)

11、胞層次清楚，細(xì)胞形態(tài)正常，排列整齊、分布均勻、形態(tài)完整、胞漿分布均勻、呈均勻鮮亮紅色、胞核呈圓形或橢圓形，有完整的核膜和清晰的核仁，呈鮮亮藍(lán)色；對照組新皮質(zhì)組織疏松而水腫明顯，殘存細(xì)胞多無完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，空泡樣變明顯，細(xì)胞層次不清，體積變小，胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡；高海拔區(qū)缺血組大腦皮質(zhì)深部組織疏松而水腫明顯加重，分布不均勻，細(xì)胞固縮呈三角形，胞漿嗜伊紅，細(xì)胞核固縮深染，核仁消失。細(xì)胞周圍及間隙增寬，水腫明顯。治療組新皮質(zhì)組織水腫明顯好轉(zhuǎn)，細(xì)胞