紅景天對大鼠心肌缺血損傷時(shí)細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：探討紅景天對大鼠異丙腎上腺素性心肌缺血性損傷的保護(hù)作用與心肌組織中細(xì)胞凋亡、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶mRNA和蛋白水平表達(dá)以及內(nèi)皮型一氧化氮合酶蛋白水平表達(dá)之間的關(guān)系。 方法：采用異丙腎上腺素(ISO)皮下注射，總量10mg／kg，制備SD大鼠的實(shí)驗(yàn)性心肌缺血性損傷模型，分正常對照組(A)、ISO損傷組(B)、曲美他嗪組(C)、高劑量紅景天組(D)及低劑量紅景天組(E)。其中，D組和E組分別腹腔注射紅景天水提取液預(yù)處理后加用IS

2、O皮下注射，紅景天總量為7．0g生藥／kg和3．5g生藥／kg；C組腹腔注射曲美他嗪預(yù)處理后加用ISO皮下注射，曲美他嗪總量70mg／kg；腹腔注射生理鹽水后加用ISO皮下注射作為B組；并以相應(yīng)注射生理鹽水作為A組。觀察各組大鼠心肌組織病理改變和血清CK-MB變化；測定心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)，分析各組心肌中細(xì)胞凋亡程度；利用RT-PCR技術(shù)檢測心肌iNOSmRNA水平的表達(dá)變化；采用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)和Westernblot技術(shù)，分

3、析iNOS蛋白質(zhì)水平表達(dá)變化；采用Westernblot技術(shù)，分析eNOS蛋白質(zhì)水平表達(dá)變化；分析iNOSmRNA、iNOS、eNOS、AI及心肌損傷程度間的相關(guān)性。 結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，B組光鏡下心肌病理損傷程度較重，見大片狀心肌組織變性壞死，間質(zhì)內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤明顯，心肌損傷的病理分級主要為II～I(xiàn)II級(87．5％)，心肌病理分級、血清CK-MB、心肌細(xì)胞AI、心肌iNOSmRNA及蛋白表達(dá)較A組顯著增高，而心肌eNOS蛋白

4、表達(dá)卻較A組顯著降低，說明大劑量ISO導(dǎo)致心肌缺血性損傷,心肌iNOS表達(dá)顯著上調(diào)和心肌細(xì)胞凋亡增加而心肌eNOS表達(dá)卻顯著下調(diào)；E組心肌病理改變主要為散在小片狀壞死灶，較少炎性細(xì)胞浸潤，病理損傷分級中75％為I～I(xiàn)I級，顯示與B組有顯著性差異，心肌細(xì)胞AI、CK-MB、iNOSmRNA及蛋白表達(dá)比B組明顯下降而eNOS蛋白表達(dá)卻比B組明顯升高；D組病理分級、心肌細(xì)胞AI、血清CK-MB均較E組明顯減低，與A組無顯著差異，心肌病理分級在

5、O～I(xiàn)級，未見明顯炎性細(xì)胞的浸潤，iNOS表達(dá)下調(diào)亦比E組更明顯，而與A組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)，D組eNOS表達(dá)上調(diào)比E組更明顯，而與A組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示紅景天有明顯的抗心肌缺血性損傷作用，可能通過下調(diào)iNOS的表達(dá)，上調(diào)eNOS的表達(dá)，減少心肌組織中的細(xì)胞凋亡而發(fā)揮作用，且適當(dāng)增加紅景天的劑量可以增加其療效：C組病理損傷分級集中于I～I(xiàn)I級，心肌病理分級及血清CK-MB測定值明顯低于B組，但光鏡下間質(zhì)內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤與B組相

6、似，心肌細(xì)胞AI、iNOSmRNA及蛋白表達(dá)也比B組明顯下降，eNOS的蛋白表達(dá)比B組明顯上升，表明曲美他嗪也具有一定的抗心肌缺血的保護(hù)功效，能下調(diào)iNOS表達(dá)和上調(diào)eNOS表達(dá)但對中性粒細(xì)胞浸潤無明顯抑制作用；相關(guān)性分析顯示，心肌細(xì)胞AI與心肌iNOS蛋白表達(dá)呈顯著正相關(guān)，與eNOS蛋白表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)；各組心肌損傷程度與iNOS蛋白表達(dá)呈顯著正相關(guān)而與eNOS蛋白表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)；各組心肌損傷分級與心肌細(xì)胞AI呈顯著正相關(guān)。結(jié)果表明

7、，心肌缺血誘導(dǎo)的iNOS高表達(dá)和eNOS低表達(dá)誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡增加，導(dǎo)致心肌損傷；紅景天能明顯抑制細(xì)胞凋亡而顯示抗缺血性損害的心肌保護(hù)功效，這種作用可能與其下調(diào)缺血心肌iNOS表達(dá)和上調(diào)eNOS表達(dá)有密切關(guān)系；曲美他嗪具有一定的心肌保護(hù)作用，其作用機(jī)制與上調(diào)iNOS表達(dá)及下調(diào)eNOS表達(dá)有關(guān)但與抑制中性粒細(xì)胞浸潤無關(guān)。 結(jié)論：心肌iNOS表達(dá)上調(diào)、eNOS下調(diào)與心肌細(xì)胞凋亡是心肌缺血性損傷的重要機(jī)制和途徑之一；抑制缺Iff,0肌