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文檔簡介
1、目的:探索紅景天苷對被動吸煙 COPD大鼠模型骨骼肌萎縮是否具有保護作用,并進行初步的作用機制探討,為紅景天苷應用于治療COPD患者改善骨骼肌萎縮提供實驗依據。
方法:60只雄性SD大鼠,按隨機原則分為對照組(C)(n=10)、對照+紅景天苷組(C/Sa)(n=10)、戒煙組(Q)(n=10)、戒煙+紅景天苷組(Q/Sa)(n=10)、被動吸煙組(S)(n=10)、被動吸煙+紅景天苷組(S/Sa)(n=10)。采用單純被動吸煙
2、方法每天2次,每次10只,持續(xù)被動吸煙4個月建立COPD大鼠模型,C、C/Sa不進行干預。實驗3個月后采用紅景天苷干預,紅景天苷干預組均采用紅景天苷(2mg/ml)10mg/kg.bw灌胃,2天一次,持續(xù)一個月,對照組以同樣劑量的生理鹽水連續(xù)灌胃一個月。干預結束后,稱量各組大鼠體重。采用小動物呼吸機檢測肺功能,同時采集BALF、全血、肺組織、骨骼肌樣本進行酶聯免疫法(ELISA)檢測IL-6、TNF-α、MDA、ROS水平。免疫組織化學
3、法檢測骨骼肌中肌肉萎縮素-1(Atrogin-1)、肌肉環(huán)狀指蛋白(MuRF-1)表達;RT-PCR檢測骨骼肌中 Atrogin-1及 MuRF-1 mRNA含量;Western blot檢測骨骼肌中Atrogin-1及MuRF-1蛋白含量;提取骨骼肌線粒體電鏡下觀察骨骼肌線粒體形態(tài)學改變。
結果:(1)體重比較:S組體重279.77±13.13(g)較C組體重346.67±15.46(g)明顯降低,具有統(tǒng)計學意義(p<0.0
4、5)。Q組體重299.98±15.80(g)較C體重346.67±15.46(g)明顯降低,具有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。Q組體重299.98±15.80(g)較S組體重279.77±13.13 (g)明顯增加,具有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。C組體重346.67±15.46(g)與C/Sa組體重357.39±13.04(g)無統(tǒng)計學意義。Q/Sa組體重322.15±10.49(g)較Q體重299.98±15.80(g)增加
5、,有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。S/Sa組體298.86±24.56(g)較S組體重279.77±13.13(g)增加,有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
?。?)ROS含量:①肺泡灌洗液(U/ml)中C組18.37±0.19、C/Sa組18.42±0.07、Q組54.01±0.64、Q/Sa干預組36.89±0.71、S組89.67±1.02、S/Sa組71.63±1.70。②肺組織(U/mgprot)中C組18.25±0.16、
6、C/Sa組18.26±0.18、Q組54.10±0.80、Q/Sa組71.97±1.61、S組90.24±1.00、S/Sa組71.63±1.70。③骨骼肌(U/mgprot)中C組18.20±0.06、C/Sa組18.20±0.21、Q組53.71±0.76、Q/Sa組36.75±0.30、S組88.63±0.43、S/Sa組71.36±0.57。④血清(U/ml)中C組18.24±0.19、C/Sa組18.24±0.06、Q組53.
7、92±0.10、Q/Sa組36.79±0.27、S組89.52±0.81、S/Sa組71.76±0.37。各標本中S組較C組濃度增高,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Q組較C組濃度增高,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Q組較 S組濃度降低,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。C與C/Sa組無統(tǒng)計學意義。Q/Sa組較Q組濃度降低,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。S/Sa組較S組濃度降低,具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
(3)MDA含量:①
8、肺泡灌洗液(nmol/mL)中C組9.96±1.01、C/Sa組9.75±0.59、Q組19.37±1.16、Q/Sa組15.33±0.16、S組25.29±1.66、S/Sa組21.22±0.91。②肺組織(nmol/mgprot)中C組9.93±0.95、C/Sa組9.90±0.53、Q組19.28±1.21、Q/Sa組15.22±0.38、S組25.22±1.42、S/Sa組21.25±0.93。③骨骼?。╪mol/mgprot)
9、中C組9.77±0.62、C/Sa組9.72±0.26、Q組19.45±1.24、Q/Sa組15.20 ±0.40、S組25.41±1.35、S/Sa組21.27±0.89。④血清(nmol/mL)中C組9.72±0.71、C/Sa組10.02±0.51、Q組19.84±1.17、Q/Sa組15.25±0.65、S組25.43±1.41、S/Sa組21.52±1.40。各標本中S組較C組濃度增高,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
10、Q組較C組濃度增高,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Q組較C組濃度降低,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。C與C/Sa組無統(tǒng)計學意義。Q/Sa組較Q組濃度降低,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。S/Sa組較S組濃度降低,具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
(4)IL-6(pg/ml)含量:①肺泡灌洗液中 C組13.48±0.72、C/Sa組13.68±2.74、Q組41.05±4.71、Q/Sa干預組25.15±6.52、S組65.58±
11、6.59、S/Sa組49.78±4.36。②肺組織中C組12.62±6.06、C/Sa組12.33±6.63、Q組41.67±5.25、Q/Sa組24.38±8.19、S組63.94±4.55、S/Sa組49.48±3.20。③骨骼肌中C組14.44±2.17、C/Sa組14.72±7.95、Q組46.50±7.17、Q/Sa組29.98±5.92、S組73.43±3.89、S/Sa組55.93±6.17。④血清中C組13.29±3.2
12、6、C/Sa組13.29±2.07、Q組39.96±1.31、Q/Sa組26.77±4.42、S組65.49±7.24、S/Sa組51.63±3.92。各標本中S組較C組濃度增高,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Q組較C組濃度增高,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Q組較S組濃度降低,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。C與C/Sa組無統(tǒng)計學意義。Q/Sa組較Q組濃度降低,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。S組較S/Sa組濃度降低,具有統(tǒng)計學意義(P<
13、0.05)。
?。?)TNF-α(pg/ml)含量:①肺泡灌洗液中C組11.61±3.70、C/Sa組10.20±3.79、Q組39.34±1.12、Q/Sa組28.24±2.83、S組62.81±1.92、S/Sa組45.32±6.09。②肺組織中C組14.31±4.24、C/Sa組14.56±7.55、Q組49.14±9.42、Q/Sa組27.83±1.94、S組83.70±2.35、S/Sa組58.18±2.21。③骨骼肌
14、中C組15.21±1.68、C/Sa組16.87±2.94、Q組49.79±2.39、Q/Sa組33.16±9.60、S組79.60±5.58、S/Sa組57.15±5.83。④血清中C組15.59±3.05、C/Sa組15.46±0.80、Q組45.09±3.64、Q/Sa組30.21±1.68、S組82.80±2.35、S/Sa組59.72±2.88。各標本中S組較C組濃度增高,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Q組較C組濃度增高,有統(tǒng)
15、計學意義(P<0.05)。Q組較S組濃度降低,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。C與C/Sa組無統(tǒng)計學意義。Q/Sa組較Q組濃度降低,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。S/Sa組較S組濃度降低,具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
?。?)免疫組化灰度值:①Atrogin-1蛋白:C組150.83±1.63、C/Sa組148.78±5.34、Q組118.04±3.93、Q/Sa組128.31±5.73、S組94.32±4.77、S/Sa組1
16、08.72±3.94。S組較C組陽性表達增強,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Q組較C組陽性表達增強,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Q組較S組陽性表達減弱,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。C組與C/Sa組無統(tǒng)計學意義。Q/Sa組較 Q組陽性表達減弱,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。S/Sa組較S組陽性表達減弱,具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。②MuRF-1蛋白:C組152.85±1.25、C/Sa組151.78±4.69、Q組120.63±4
17、.91、Q/Sa組136.52±2.74、S組100.36±5.33、S/Sa組115.12±4.05。S組較C組陽性表達增強,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。S組較C組陽性表達增強有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Q組較C組陽性表達減弱,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。C組與C/Sa組無統(tǒng)計學意義。Q/Sa組較Q組陽性表達減弱,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。S/Sa組較S組陽性表達減弱,具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
?。?)Atr
18、ogin-1 mRNA表達倍數:C組0.87±0.19、C/Sa組1.06±0.12、Q組2.72±0.17、Q/Sa組1.67±0.15、S組4.21±0.27、S/Sa組3.70 ±0.20。S組較C組表達增多,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Q組較C組表達增多,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Q組較S組表達減少,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。C組與C/Sa組無統(tǒng)計學意義。Q/Sa組較Q組表達減少,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)
19、。S/Sa組較S組表達減少,具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
(8)MuRF-1 mRNA表達倍數:C組1.11±0.05、C/Sa組1.07±0.10、Q組2.86±0.35、Q/Sa組1.69±0.08、S組3.88±0.33、S/Sa組3.09±0.56。S組較C組表達增多,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Q組較C組表達增多,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Q組較S組表達減少,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。C組與C/Sa組無
20、統(tǒng)計學意義。Q/Sa組較Q組表達減少,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。S/Sa組較S組表達減少,具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
?。?)免疫印跡結果:①Atrogin-1蛋白(OD):C組0.15±0.01、C/Sa組0.15±0.03、Q組0.44±0.04、Q/Sa組0.29±0.03、S組0.75±0.06、S/Sa組0.58±0.05。S組較C組表達增強,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Q組較C組表達增強,有統(tǒng)計學意義(P
21、<0.05)。Q組較S組表達減弱,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。C組與C/Sa組無統(tǒng)計學意義。Q/Sa組較Q組表達減弱,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。S/Sa組較S組表達減弱,具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。②MuRF-1蛋白(OD):C組0.27±0.03、C/Sa組0.28±0.01、Q組0.76±0.08、Q/Sa組0.55±0.05、S組1.29±0.11、S/Sa組1.10±0.10。S組較C組表達增強,有統(tǒng)計學意義(P<0.
22、05)。Q組較C組表達增強,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Q組較S組表達減弱,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。C組與C/Sa組無統(tǒng)計學意義。Q/Sa組較Q組表達減弱,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。S/Sa組較S組表達減弱,具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
?。?0)線粒體形態(tài)學觀察:S組較C組大量線粒體的嵴斷裂、減少、線粒體空泡化;線粒體固、體積縮小。Q組較C組大量線粒體的嵴斷裂、減少、線粒體空泡化;線粒體固、體積縮小。S組較Q組
23、大量線粒體的嵴斷裂、減少、線粒體空泡化;線粒體固、體積縮小。C組與C/Sa組線粒體形態(tài)無明顯差異。Q組較Q/Sa組線粒體的嵴斷裂、減少、線粒體空泡化;線粒體固、體積縮小現象增多。S組較S/Sa組線粒體的嵴斷裂、減少、線粒體空泡化;線粒體固、體積縮小現象增多。(11)Atrogin-1、MuRF-1 mRNA(倍數)與大鼠體重相關性:Atrogin-1、MuRF-1 mRNA表達(倍數)與大鼠體重呈負相關(分別為:R=-0.910、P<0
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