糖皮質(zhì)激素受體介導(dǎo)的激素性白內(nèi)障形成機(jī)制的研究.pdf

1、目的：糖皮質(zhì)激素廣泛應(yīng)用于臨床疾病的治療。長期全身、局部應(yīng)用糖皮質(zhì)激素可導(dǎo)致激素性白內(nèi)障，其發(fā)病機(jī)制尚不明確。目前已證實晶狀體上皮細(xì)胞存在糖皮質(zhì)激素受體。糖皮質(zhì)激素作用于人晶狀體上皮細(xì)胞后，與其受體結(jié)合，其激素受體復(fù)合物與相應(yīng)靶基因的糖皮質(zhì)激素反應(yīng)元件（GRE）結(jié)合后調(diào)控大量靶基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而影響相應(yīng)靶基因的功能。其中主要涉及細(xì)胞膜的轉(zhuǎn)運和細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的改變等。晶狀體通過Na+，K+-ATP酶維持離子進(jìn)出細(xì)胞的平衡，其功能的改變將會引起

2、晶狀體細(xì)胞內(nèi)水鈉潴留，形成白內(nèi)障。波形蛋白是重要的細(xì)胞骨架蛋白，在晶狀體上皮細(xì)胞中適量表達(dá)，對于維持晶狀體細(xì)胞正常的形態(tài)和功能，具有重要意義。本實驗將應(yīng)用糖皮質(zhì)激素受體拮抗劑RU486探討糖皮質(zhì)激素受體介導(dǎo)的大鼠激素性白內(nèi)障Na+，K+-ATP酶和波形蛋白的變化，探討糖皮質(zhì)激素受體在激素性白內(nèi)障的發(fā)病中的作用機(jī)制。
　　方法：大鼠透明晶狀體隨機(jī)分為對照組、糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的激素白內(nèi)障組（地塞米松5μM）、糖皮質(zhì)激素受體拮抗劑RU48

3、6組（地塞米松5μM+RU4865μM）。離體晶狀體孵育7天，倒置顯微鏡動態(tài)觀察晶狀體的透明度。HE染色分析三組晶狀體的組織形態(tài)學(xué)變化，分光光度計動態(tài)分析Na+，K+-ATP酶的活性，蛋白質(zhì)印跡法和免疫組化法分析Na+，K+-ATP酶α1和波形蛋白的蛋白表達(dá)，RT-PCR分析Na+，K+-ATP酶α1和波形蛋白的mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：白內(nèi)障組與其它兩組相比，晶狀體在第5天出現(xiàn)霧狀混濁（P<0.05），第7天霧狀混濁更明顯（P<

4、0.01），而對照組和拮抗劑組保持透明。白內(nèi)障組與其它兩組相比，Na+，K+-ATP酶活性隨孵育時間的延長而逐漸下降（P<0.001），而對照組和拮抗劑組無明顯變化。HE染色顯示白內(nèi)障組與對照組和拮抗劑組相比，晶狀體纖維結(jié)構(gòu)排列紊亂，細(xì)胞間隙增寬。白內(nèi)障組Na+，K+-ATP酶α1蛋白和mRNA表達(dá)下降，而對照組和拮抗劑組表達(dá)正常。白內(nèi)障組波形蛋白的蛋白表達(dá)下降，而對照組和拮抗劑組表達(dá)正常。三組中波形蛋白mRNA表達(dá)無明顯改變。