羅格列酮調(diào)節(jié)腎素-血管緊張素系統(tǒng)抑制動(dòng)脈粥樣硬化形成的分子機(jī)制.pdf

1、目的：通過(guò)動(dòng)物及細(xì)胞研究探討過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)激活調(diào)節(jié)腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)抑制動(dòng)脈粥樣硬化(AS)形成的分子機(jī)制。 方法： (1)動(dòng)物研究：選擇6周齡雄性Wistar-Kyoto(WKY)鼠38只，體重190-210g，隨機(jī)分為下列組：普通飼料組(Con組，n=8)，高膽固醇飼料組(Cho組，n=10)，高膽固醇飼料加羅格列酮干預(yù)組(Ros組，n=10)，高膽固醇飼料加厄貝沙坦干預(yù)組(I

2、rb組，n=10)。高膽固醇飼養(yǎng)1個(gè)月后開(kāi)始分別給予羅格列酮(4 mg·Kg-1·day-1)、厄貝沙坦(50 mg·Kg-1·day-1)干預(yù)。6個(gè)月后，處死動(dòng)物之前秤體重，采集血樣本，分別采用全自動(dòng)生化分析儀、放射免疫(RIA)進(jìn)行血脂分析、血漿以及主動(dòng)脈組織局部血管緊張素II cAngII)濃度測(cè)定。分離胸主動(dòng)脈，取主動(dòng)脈弓近段3mm，分別HE染色顯微鏡下和電鏡下觀察主動(dòng)脈組織形態(tài)學(xué)變化。半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和

3、免疫組化測(cè)定AngII1型受體(AT1R)和2型受體(AT2R) mRNA和蛋白表達(dá)水平。 (2)細(xì)胞研究：采用酶消化法培養(yǎng)原代大鼠血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)，電鏡及平滑肌α-肌動(dòng)蛋白(SM-α-actin)免疫組織化學(xué)染色法鑒定，傳代后取第6-10代細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。以終濃度為1 μmol/L AngII誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞6小時(shí)，分別以不同終濃度的羅格列酮(20、30、40、50、60 μmol/L)和厄貝沙坦(1、2.5

4、、5、10、20 μmol/L)干預(yù)12小時(shí)或以終濃度為30 μmol/L的羅格列酮和5μmol/L的厄貝沙坦分別干預(yù)6、12、18、24小時(shí)。采用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法(MTT)測(cè)定細(xì)胞增殖率(OD值)。 結(jié)果：與對(duì)照組相比，高膽固醇飼養(yǎng)大鼠體重明顯增加，兩藥物顯著抑制高膽固醇飼養(yǎng)誘發(fā)的體重增加(P<0.05，0.01)，厄貝沙坦在體重控制方面強(qiáng)于羅格列酮(P<0.05)；高膽固醇飼養(yǎng)6個(gè)月引起明顯高脂血癥，包括甘油三

5、酯(TG)、膽固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL-C)升高(P<0.01)，并呈腹型肥胖體態(tài)，羅格列酮和厄貝沙坦明顯抑制高膽固醇飼養(yǎng)誘發(fā)的TG、TC的升高。然而，對(duì)LDL-C的作用不同，前者降低LDL-C的升高(P<0.01)，后者對(duì)LDL-C沒(méi)有作用；各實(shí)驗(yàn)組之間血漿Ang II水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與對(duì)照組比較，高膽固醇組大鼠主動(dòng)脈組織Ang II明顯升高(P<0.01)，羅格列酮和厄貝沙坦均明顯抑制主動(dòng)脈組織AngII的升高(P<0.

6、01)；高膽固醇飼養(yǎng)大鼠主動(dòng)脈近段呈現(xiàn)明顯動(dòng)脈粥樣硬化損傷的脂質(zhì)條紋，顯微鏡下可見(jiàn)動(dòng)脈內(nèi)膜下脂質(zhì)沉積、平滑肌細(xì)胞增生并向內(nèi)膜下移行，電鏡下顯示內(nèi)皮細(xì)胞變性壞死，向管腔剝離、脫落，細(xì)胞間連接變直變寬，內(nèi)皮下間隙擴(kuò)大。但是在所有的切片中尚未觀察到典型的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，然而，這些特征性病理改變被羅格列酮和厄貝沙坦明顯抑制，兩藥物組之間無(wú)明顯差異；高膽固醇組大鼠主動(dòng)脈組織AT1R、AT2RmRNA和蛋白表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P<0.01)，羅格

7、列酮和厄貝沙坦一致地降低AT1RmRNA和蛋白表達(dá)(P<0.01)，對(duì)AT2R表達(dá)的作用卻相反，前者升高AT2RmRNA和蛋白表達(dá)(P<0.05，0.01)，而后者降低其表達(dá)(P<0.01)；在一定濃度范圍內(nèi)，羅格列酮和厄貝沙坦以濃度和時(shí)間依賴抑制AngII誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞分化增殖。 結(jié)論： (1)動(dòng)物研究證實(shí)PPARγ配體激動(dòng)劑羅格列酮和AngII 1型受體拮抗劑厄貝沙坦通過(guò)控制高膽固醇飲食誘發(fā)的體重增加、改善脂質(zhì)