大豆黃酮和酸性肽對(duì)人肝癌SMMC7721細(xì)胞增殖及腫瘤干細(xì)胞CD133表達(dá)的影響.pdf

1、背景和目的：
　　 肝癌是臨床上最常的見(jiàn)惡性腫瘤之一。其死亡率在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中列第3位。我國(guó)是世界上肝癌發(fā)病比較集中的國(guó)家，每年新發(fā)病例數(shù)約占全球的.45％。由于肝癌惡性程度高，發(fā)展迅速，治療困難，病死率高，始終是我國(guó)醫(yī)學(xué)界研究的重大課題。
　　 目前對(duì)肝癌的治療方法主要有手術(shù)、放療、化療及生物治療等手段，但總體治療效果尚不理想。腫瘤干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)使人們對(duì)腫瘤有了新的認(rèn)識(shí)。人們認(rèn)識(shí)到腫瘤起源于腫瘤干細(xì)胞。腫瘤的形成是腫

2、瘤中的腫瘤干細(xì)胞增殖的結(jié)果。這些細(xì)胞雖然在腫瘤組織中的數(shù)量非常少，只占腫瘤組織中細(xì)胞總數(shù)的1％，但他們具有耐藥性和不斷增殖為腫瘤組織的能力。因此，只有消滅這些細(xì)胞才可能徹底治愈腫瘤。
　　 腫瘤干細(xì)胞最早在血液病急性髓細(xì)胞性白血病中被發(fā)現(xiàn)，其細(xì)胞表面存在著特異性的標(biāo)志物。隨后在乳腺癌，腦腫瘤，前列腺癌以及肺癌組織中也相繼發(fā)現(xiàn)了腫瘤干細(xì)胞。腫瘤干細(xì)胞表面存在著多種腫瘤標(biāo)記物。其中應(yīng)用最廣泛的是CD133。一些報(bào)道顯示，CD133陽(yáng)

3、性的細(xì)胞與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移和耐藥性的產(chǎn)生都有密切的關(guān)系。腫瘤干細(xì)胞不僅存在于腫瘤組織中，也存在于體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞系中。
　　 已糖激酶是一種磷酸化己糖特別是葡萄糖的酶。而葡萄糖是大多數(shù)組織和器官通過(guò)糖代謝獲得能量的主要物質(zhì)。葡萄糖經(jīng)磷酸化生成6-磷酸葡萄糖，這是糖代謝的第一步。堿性磷酸酶是一種催化核酸、蛋白等分子去除磷酸基團(tuán)的酶。己糖激酶和堿性磷酸酶的活性反映著細(xì)胞的代謝能力。在腫瘤細(xì)胞中，己糖激酶和堿性磷酸酶的活性通

4、常都是高的。
　　 大豆黃酮和酸性肽具有抑制肝癌細(xì)胞增殖的作用，但是否抑制腫瘤干細(xì)胞中CD133的表達(dá)，尚未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)。故此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)大豆黃酮和酸性肽對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖和腫瘤干細(xì)胞CD133的表達(dá)影響做了初步探討。
　　 材料及方法：
　　 1．人肝癌SMMC7721細(xì)胞培養(yǎng)，以獲得對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞。
　　 2．將大豆黃酮和酸性肽配置成100μg/ml、200μg/ml、300μg/ml、400μg/ml和500

5、ug/ml濃度，并處理對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞24小時(shí)，48小時(shí)和72小時(shí)，并采用MTT法測(cè)定細(xì)胞的成活率，并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。
　　 3．大豆黃酮和酸性肽分別處理對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人肝癌SMMC7721細(xì)胞，用試劑盒法測(cè)定人肝癌SMMC7721細(xì)胞中的己糖激酶和堿性磷酸酶的活性。
　　 4．大豆黃酮和酸性肽分別處理對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人肝癌SMMC7721細(xì)胞，用Western Blotting方法檢測(cè)CD133的表達(dá)水平。
　　

6、結(jié)果：
　　 1．用大豆黃酮和酸性肽處理人肝癌SMMC7721細(xì)胞，均對(duì)其增殖具有抑制作用，并且抑制作用與濃度密切相關(guān)。
　　 2．用大豆黃酮和酸性肽處理人肝癌SMMC7721細(xì)胞，均抑制人肝癌SMMC7721細(xì)胞中的己糖激酶和堿性磷酸酶的活性．
　　 3．Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示，大豆黃酮和酸性肽可降低人肝癌腫瘤干細(xì)胞中CD133的表達(dá)。
　　 結(jié)論：
　　 1．在實(shí)驗(yàn)濃度上，大豆黃