紫外光-核黃素角膜膠原交聯(lián)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、紫外光/核黃素角膜膠原交聯(lián)由于有效的提高角膜生物力學(xué)，阻止或延緩圓錐角膜的發(fā)展受到廣泛青睞。但作為一種新的治療方法，必然存在一定的局限性。本課題是針對(duì)紫外光/核黃素角膜膠原交聯(lián)術(shù)臨床應(yīng)用中亟待解決的問題進(jìn)行了一些基礎(chǔ)研究。分別如下：
　?。?）探討紫外光/核黃素角膜交聯(lián)對(duì)角膜神經(jīng)功能和形態(tài)的影響，為指導(dǎo)紫外光/核黃素角膜交聯(lián)更安全的臨床應(yīng)用提供客觀實(shí)驗(yàn)依據(jù)。通過對(duì)紫外光/核黃素角膜交聯(lián)后不同時(shí)間兔眼角膜知覺閾值的檢測發(fā)現(xiàn)去上皮紫外

2、光/核黃素角膜交聯(lián)后7天紫外光照射中央?yún)^(qū)角膜知覺下降到最低，90天后接近正常；而在交聯(lián)后7天紫外光照射周邊區(qū)角膜知覺顯著高于正常。保留上皮紫外光/核黃素角膜交聯(lián)后7天紫外光照射中央?yún)^(qū)角膜知覺下降到最低但較去上皮紫外光/核黃素角膜交聯(lián)下降程度輕，30天后恢復(fù)至正常。通過角膜神經(jīng)乙酰膽堿脂酶染色光學(xué)顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)去上皮紫外光/核黃素角膜交聯(lián)后3天，紫外光照射區(qū)上皮下神經(jīng)叢開始潰變。術(shù)后7天紫外光照射區(qū)內(nèi)淺層角膜神經(jīng)消失，深層基質(zhì)神經(jīng)干可見，

3、同時(shí)紫外光照射區(qū)邊緣出現(xiàn)少量再生神經(jīng)纖維。術(shù)后30天，在紫外光照射區(qū)可見較多細(xì)、長、直的、無明顯方向性的神經(jīng)纖維。術(shù)后90天，在紫外光照射區(qū)可見形態(tài)異常過度再生的上皮下神經(jīng)。隨后，再生神經(jīng)相對(duì)密度逐漸減少，形態(tài)逐漸規(guī)則。保留上皮紫外光/核黃素角膜交聯(lián)后可見上皮內(nèi)神經(jīng)末稍的潰變，以及隨后的上皮神經(jīng)末稍的再生，大約90天已經(jīng)恢復(fù)正常形態(tài)及正常的角膜神經(jīng)密度。結(jié)果表明，紫外光/核黃素角膜交聯(lián)引起角膜神經(jīng)損傷和角膜知覺降低甚至消失，隨后角膜神經(jīng)

4、再生重建及角膜知覺恢復(fù)。另外推測角膜上皮對(duì)角膜深部組織具有保護(hù)作用。
　?。?）基于角膜上皮對(duì)角膜深部組織有保護(hù)作用開展保留角膜上皮紫外光/核黃素角膜交聯(lián)研究。通過比較保留角膜上皮紫外光/核黃素角膜交聯(lián)和去上皮紫外光/核黃素角膜交聯(lián)后兔眼角膜組織結(jié)構(gòu)和生物力學(xué)特性，發(fā)現(xiàn)去上皮紫外光/核黃素角膜交聯(lián)后角膜生物力學(xué)特性顯著高于保留角膜上皮的紫外光/核黃素角膜交聯(lián)，但HE染色組織切片光鏡觀察、透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)保留上皮紫外光/核黃素角膜交

5、聯(lián)沒有觀察到去上皮紫外光/核黃素角膜交聯(lián)的角膜細(xì)胞凋亡、角膜水腫，只發(fā)現(xiàn)角膜上皮層輕微損傷改變。保留角膜上皮紫外光/核黃素角膜交聯(lián)雖然能保護(hù)角膜深層結(jié)構(gòu)但不能有效提高交聯(lián)角膜的角膜生物力學(xué)特性，因此不被建議為圓錐角膜的常規(guī)治療方法，可能僅適合角膜較薄者。
　?。?）通過研究不同紫外光照射強(qiáng)度（4.2mW/cm2、3mW/cm2）、照射時(shí)間（30分鐘、60分鐘）組合的紫外光/核黃素聯(lián)合葡萄糖角膜交聯(lián)后角膜生物力學(xué)特性和熱收縮溫度，初

6、步探討紫外光/核黃素聯(lián)合葡萄糖能否協(xié)同誘導(dǎo)角膜交聯(lián)效應(yīng)，從而為改進(jìn)紫外光/核黃素角膜交聯(lián)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在4.2mW/cm2紫外光照射60分鐘實(shí)驗(yàn)中，紫外光/核黃素/葡萄糖組角膜彈性模量、最大應(yīng)力、角膜熱收縮溫度顯著高于紫外光/葡萄糖組或紫外光/核黃素組。其它三實(shí)驗(yàn)中所得到的角膜彈性模量、最大應(yīng)力、最大應(yīng)變、熱收縮溫度，紫外光/核黃素/葡萄糖組與紫外光/核黃素組比較沒有顯著差異。結(jié)果提示當(dāng)交聯(lián)參數(shù)在一定范圍內(nèi)葡萄糖聯(lián)合紫外光/核黃