非切削性角膜屈光手術(shù)研究即微波角膜成形術(shù)與膠原交聯(lián)手術(shù)基礎(chǔ)研究.pdf

1、第一部分微波角膜成形術(shù)相關(guān)參數(shù)屈光效應(yīng)觀察
　　 第一節(jié)器官培養(yǎng)法保存角膜與前房模型建立
　　 目的：探討器官培養(yǎng)法保存角膜與人工前房應(yīng)用于建立適合微波角膜成形術(shù)研究的角膜材料的可行性。
　　 方法：12片供體人鞏膜角膜片，隨機(jī)分為A、B兩組；A組為實(shí)驗(yàn)組，保存1周，保存條件為37℃，5％CO2，保存液為MEM培養(yǎng)液，加入2％胎牛血清；B組為空白對照組；實(shí)驗(yàn)組于實(shí)驗(yàn)開始時(shí)、保存7天時(shí)，A超、角膜內(nèi)皮鏡、角膜地形圖

2、分別檢查角膜中央厚度、角膜內(nèi)皮細(xì)胞計(jì)數(shù)、角膜內(nèi)皮細(xì)胞面積、差異指數(shù)、角膜前、后表面曲率，計(jì)算內(nèi)皮細(xì)胞丟失率。實(shí)驗(yàn)組與對照組分別行細(xì)胞骨架(肌動蛋白)免疫熒光染色、細(xì)胞核吖啶橙免疫熒光染色觀察角膜上皮細(xì)胞以及內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)。
　　 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組保存7天時(shí)角膜透明。實(shí)驗(yàn)開始時(shí)與保存7天時(shí)內(nèi)皮細(xì)胞計(jì)數(shù)分別為2714±372個(gè)/m㎡、2562±406個(gè)/m㎡，內(nèi)皮細(xì)胞面積分別為375±56μ㎡、399±61μ㎡，差異指數(shù)分別為0.22

3、±0.075、0.26±0.010，內(nèi)皮細(xì)胞丟失率5.60％±4.36，角膜中央厚度分別為538±43μm、569±31μm，角膜前表面曲率分別為47.70±2.29D、48.46±2.02D，角膜后表面曲率分別為-(6.76±0.70)D、-(6.80±0.45)D。角膜內(nèi)皮細(xì)胞密度、內(nèi)皮細(xì)胞面積、差異指數(shù)、角膜中央厚度以及角膜前表面曲率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。角膜后表面曲率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。角膜上皮細(xì)胞及角膜內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)實(shí)驗(yàn)組與對照組無明

4、顯差異。
　　 結(jié)論：建立符合微波角膜成形術(shù)實(shí)驗(yàn)研究要求的角膜材料具有可行性。
　　 第二節(jié)微波角膜成形術(shù)屈光效應(yīng)研究
　　 目的：探索微波角膜成形術(shù)相關(guān)參數(shù)及術(shù)后動態(tài)變化特點(diǎn)。
　　 方法：40片供體人鞏膜角膜片，隨機(jī)分為4組，每組各10片，分別按照A組100W/100ms，B組150W/200SM，C組150W/500ms，D組150W/600ms，行微波角膜成形術(shù)。術(shù)前，術(shù)后7天行角膜地形圖檢查，術(shù)

5、后30min，1天，3天，5天，7天行倒置相差顯微鏡檢查。
　　 結(jié)果：術(shù)后第7天，角膜前表面曲率較術(shù)前變平坦，與術(shù)前差值分別為：A組1.25±0.72D，B組2.07±0.98D，C組5.43±1.22D，D組6.37±3.58D，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。倒置相差顯微鏡觀察可見A組術(shù)后第3天8片角膜完全恢復(fù)透明，第5天10片恢復(fù)透明；B組第3天5片恢復(fù)透明，第5天10片恢復(fù)透明；C組第3天無角膜恢復(fù)透明，第5天9片恢復(fù)透明，第7

6、天仍有1片角膜未能完全恢復(fù)透明；D組第3天無角膜恢復(fù)透明，第5天及第7天均為8片角膜恢復(fù)透明。
　　 結(jié)論：微波角膜成形術(shù)離體最佳參數(shù)，在功率100W至150W，作用時(shí)間100ms至600ms間，可使角膜前表面變平坦。
　　 第二部分膠原交聯(lián)參數(shù)對角膜細(xì)胞活力的影響
　　 目的：探討核黃素-紫外線交聯(lián)中氣體介質(zhì)、交聯(lián)劑溶液濃度以及紫外線作用參數(shù)，包括功率、時(shí)長和累積量，對角膜基質(zhì)細(xì)胞、角膜內(nèi)皮細(xì)胞活力的影響。

7、r>　　 方法：原代培養(yǎng)人角膜基質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞，MTT法分別測定不同條件下兩種細(xì)胞的活力。
　　 結(jié)果：空氣、氧氣、氮?dú)馊N氣體介質(zhì)對角膜基質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞活力無明顯影響，核黃素溶液不同濃度(空白對照、0.025％、10％)間角膜基質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞活力比較無顯著差異，紫外線累積量獨(dú)立于作用時(shí)長、功率影響角膜基質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞活力。
　　 結(jié)論：紫外線累積量在0至4.05mJ/c㎡范圍內(nèi)，照射功率與照射時(shí)間的變化對角膜