胃癌中RASSF2A和p16基因甲基化及其表達異常的實驗研究.pdf

1、目的：檢測胃癌及癌旁組織中RASSF2A和p16的甲基化及表達情況，探討基因啟動子區(qū)CpG島甲基化與基因表達缺失之間的關(guān)系；并進一步研究RASSF2A和p16在胃癌中的作用機制以及與胃癌患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。方法：應(yīng)用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(MSP)、半定量RT-PCR法分別檢測胃癌和癌旁組織中RASSF2A和p16啟動子區(qū)CpG島甲基化、mRNA表達情況，并用免疫組化S-P法檢測p16蛋白的表達情況。 結(jié)果：(1)RA

2、SSF2A在胃癌組織中的甲基化率為57.14％(16/28)，顯著高于癌旁組織中甲基化率10.71％(3/28)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=13.46，P＜0.01)；胃癌組織中，甲基化率隨浸潤深度的增加而增高，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的甲基化率分別為81.25％(13/16)和25％(3/12)，兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；隨分化程度的降低，甲基化率有增高的趨勢，但是差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0

3、.05)；RASSF2A甲基化率與胃癌患者的性別、年齡無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 (2)RASSF2AmRNA在胃癌組織中的相對光密度值為0.827±0.238，顯著低于癌旁組織中的相對光密度值1.360±0.076，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(T=-5.94，P＜0.01)；胃癌組織中，RASSF2AmRNA表達強度隨分化程度的降低而降低，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者相對光密度值為0.604±0.254，顯著低于無

4、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者相對光密度值0.873±0.212(P＜0.05)；隨浸潤深度的增加表達強度有下降的趨勢，但是無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。RASSF2AmRNA表達與胃癌患者的性別、年齡無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 (3)16例胃癌組織中RASSF2A啟動子區(qū)CpG島發(fā)生了甲基化，其中6例同時伴隨mRNA表達缺失。啟動子區(qū)CpG島甲基化和mRNA表達有顯著相關(guān)性(r=-0.452，P=0.016)；而且在發(fā)生甲基化的胃癌組織中

5、，RASSF2AmRNA表達明顯下降(相對光密度值=0.662±0.201)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=3.824，P＜0.01)。(4)p16在胃癌及癌旁組織中的甲基化率分別為46.43％(13/28)、7.14％(2/28)，胃癌組織中甲基化率顯著高于癌旁組織(χ2=11.02，P＜0.01)；高～中分化程度的胃癌組織中甲基化率為15.38％(2/13)，明顯低于低～未分化程度的甲基化率73.33％(11/15)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜

6、0.05)；隨胃癌組織浸潤深度的增加，甲基化率也逐漸增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的甲基化率分別為68.75％(11/16)和16.67％(2/12)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；p16甲基化率與胃癌患者的性別、年齡無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。(5)p16mRNA在胃癌組織中的相對光密度值為1.001±0.378，顯著低于癌旁組織中的相對光密度值1.611±0.125，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(T

7、=-5.62，P＜0.01)；胃癌組織中，p16mRNA表達強度隨分化程度的降低而降低，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者相對光密度值為0.789±0.299，顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者相對光密度值1.253±0.304(P＜0.01)；隨胃癌組織浸潤深度的增加，表達強度逐漸下降，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；p16mRNA表達與胃癌患者的性別、年齡無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 (6)p16蛋白在胃癌中的陽性表達率

8、為35.71％(10/28)，顯著低于癌旁組織中的陽性表達率100％(28/28)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=26.53，P＜0.01)；隨胃癌組織分化程度的降低，p16蛋白陽性表達率下降，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的蛋白表達率分別為25％(4/16)和50％(6/12)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；隨胃癌組織浸潤深度的增加，p16蛋白陽性表達率有下降的趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；p16蛋

9、白陽性表達與胃癌患者的性別、年齡無統(tǒng)計學(xué)意義。 (7)13例胃癌組織中p16啟動子區(qū)CpG島發(fā)生了甲基化，其中4例同時伴隨mRNA表達缺失。啟動子區(qū)CpG島甲基化和mRNA表達有顯著相關(guān)性(r=-0.439，P=0.020)；在發(fā)生甲基化的胃癌組織中，p16mRNA表達下調(diào)(相對光密度值=0.656±0.185)，明顯低于未發(fā)生甲基化的胃癌組織中的mRNA表達(相對光密度值=1.211±0.300)，(t=4.988，P＜0.0

10、1)。 (8)13例胃癌組織中p16啟動子區(qū)CpG島發(fā)生了甲基化，其中12例同時伴隨蛋白表達缺失。啟動子區(qū)CpG島甲基化和蛋白表達有顯著相關(guān)性(r=-0.544，P=0.003)。 (9)胃癌組織中RASSF2A和p16啟動子區(qū)CpG島同時發(fā)生甲基化率為32.14％(9/28)，兩者在胃癌中發(fā)生甲基化無相關(guān)性(r=0.227，P=0.245)。(10)胃癌組織中RASSF2AmRNA和p16mRNA共同表達率為67.86

11、％ (19/28)，兩者在胃癌中mRNA表達無相關(guān)性(r=0.036，P=0.858)；RASSF2AmRNA和p16mRNA在胃癌組織中的相對光密度值分別為0.827±0.238和1.001±0.378，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(T=-1.440，P=0.150)。 結(jié)論：1、胃癌中RASSF2A和p16啟動子區(qū)CpG島甲基化顯著高于癌旁組織，且兩者甲基化與浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，說明RASSF2A和p16甲基化不僅參與

12、了胃癌的發(fā)生而且與其惡性進展密切相關(guān)，可作為估計腫瘤具有侵襲行為的重要生物標(biāo)志； 2、RASSF2AmRNA、p16mRNA和p16蛋白在胃癌中表達缺失、下降，且與RASSF2A和p16啟動子區(qū)CpG島甲基化密切相關(guān)，說明二者甲基化可能是導(dǎo)致RASSF2AmRNA、p16mRNA和p16蛋白表達缺失、下降的機制之一。 3、p16mRNA和p16蛋白表達隨胃癌分化程度的降低而降低、p16甲基化率隨胃癌分化程度的增高而降低，