經(jīng)皮三叉神經(jīng)電刺激對慢性癲癇大鼠癲癇狀態(tài)所致海馬神經(jīng)元損傷的保護作用及其機制的探索.pdf

1、目的:
　　1.觀察經(jīng)皮三叉神經(jīng)電刺激(TcTNS)對匹羅卡品誘發(fā)的癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)所致海馬神經(jīng)元損傷的保護作用。
　　2.觀察觀察經(jīng)皮三叉神經(jīng)電刺激(TcTNS)對匹羅卡品誘發(fā)的慢性癲癇模型大鼠海馬神經(jīng)元GAD65/67表達的影響,以探討經(jīng)皮三叉神經(jīng)電刺激治療癲癇及腦保護作用的可能機制。
　　資料和方法:
　　實驗一:
　　選用健康成年雄性SD大鼠,采用隨機數(shù)字表法將大鼠隨機分為二組,匹羅卡品模型組和

2、對照組,模型組用匹羅卡品誘導癲癇點燃模型,對照組注射等量的生理鹽水,經(jīng)過行為學觀察兩周后,具有慢性癲癇自發(fā)性再發(fā)作的為模型制備成功大鼠,再將模型制備成功大鼠采用隨機數(shù)字表法分為兩組,治療組和模型組,分別給予三叉神經(jīng)電刺激和假刺激一個月(刺激參數(shù)為頻率140Hz,電流10mA,脈寬0.5ms,正向脈沖刺激30s間歇5min,連續(xù)刺激1h,假刺激組各項參數(shù)均為0。刺激時間定為每天12:00-16:00)后終止刺激,再次注射皮羅卡品誘導一次癲

3、癇持續(xù)狀態(tài)(SE)并于SE后24h,48h,72h處死大鼠并取材,對照組亦在相應時間點取材,采用TUNNEL和NISSEL染色觀察各組大鼠海馬神經(jīng)元細胞的凋亡和壞死情況。組間比較采用配對t檢驗,以p﹤0.05定義為差別有統(tǒng)計學意義。
　　實驗二:
　　選用健康成年雄性SD大鼠,采用同實驗一的方法建立癲癇點燃模型,將慢性癲癇模型制備成功者用隨機數(shù)字表法分為模型組與治療組,分別給予三叉神經(jīng)電刺激與假刺激一個月(刺激參數(shù)及時間同實

4、驗一),于停止刺激后24h,72h,一周,二周,四周處死大鼠并取材,對照組亦于相應時間點取材。采用免疫組化的方法研究大鼠海馬及皮層GAD65、67的表達情況,組間比較采用配對t檢驗,組內(nèi)比較采用單因素方差分析,以p﹤0.05定義為差別有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:
　　1.在實驗一中:
　　1.1 TUNNEL染色:SE后各時間點治療組和模型組均可見TUNNEL陽性細胞,主要分布在海馬的CA1和CA3區(qū),SE后24h,48

5、h,72h治療組CA3區(qū)的TUNNEL陽性細胞較模型組顯著減少(p<0.05),以72小時尤為明顯(p<0.01)正常對照組可見少量TUNNEL陽性細胞。
　　1.2 NISSEL染色:正常對照組顯示海馬CA1和CA3區(qū)神經(jīng)元細胞排列整齊緊密,沒有明顯的神經(jīng)元缺失,細胞核呈圓形或橢圓形,胞漿內(nèi)尼氏小體豐富。模型組各時間點可見不同程度的神經(jīng)元丟失,部分神經(jīng)元胞體皺縮,胞漿深染,核固縮,錐體細胞存活數(shù)較正常細胞減少,尤以72小時最為明

6、顯(p<0.01)。經(jīng)皮三叉神經(jīng)刺激治療組各時間點大鼠海馬CA1,CA3區(qū)神經(jīng)元細胞尚清晰完整,部分細胞出現(xiàn)染色質(zhì)凝集,神經(jīng)元丟失情況較模型組顯著下降,即治療組Nissl染色細胞數(shù)顯著多于模型組(p<0.05)。
　　2.在實驗二中:
　　2.1:海馬區(qū)及皮層均有GAD65的陽性細胞表達,尤以海馬的CA3區(qū)表達最為明顯,主要在胞核中表達,陽性細胞為棕紅色顆粒,經(jīng)皮三叉神經(jīng)刺激治療組較假刺激組相比,各時間點治療組陽性細胞表達均

7、高于模型組(p<0.05),治療組GAD65的表達于停止刺激后72小時-7天達到高峰,較模型組有極顯著差異(p<0.01)。后GAD65的表達下降,至28天接近正常表達水平。
　　2.2:海馬區(qū)及皮層均可見GAD67陽性細胞,在海馬的CA3區(qū)及DG區(qū)表達最為明顯,主要在胞漿中表達,與模型組各時間點相比較,治療組的表達遠大于模型組(p<0.05)。組內(nèi)比較發(fā)現(xiàn),GAD67無明顯的時間變化趨勢,至停止刺激后28天,治療組的GAD67的