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文檔簡介
1、目的:
研究wnt/β-catenin信號通路在紫杉醇治療宮頸癌中的作用機制。
方法:
1. MTT比色法檢測不同濃度紫杉醇對人宮頸癌Caski細胞株增殖的影響。
收集對數(shù)生長期的宮頸癌 Caski細胞,孵育至細胞貼壁后加入濃度分別為1000.00μg/ml、100.00μg/ml、10.00μg/ml、1.00μg/ml、0.10μg/ml、0.01μg/ml、0.001μg/ml的紫杉醇溶液各
2、100μl,每組溶液濃度設(shè)五個復(fù)孔,孵育48小時后,每孔加入0.5%MTT溶液20μl,繼續(xù)培養(yǎng)約4小時。在酶聯(lián)免疫檢測儀OD570nm處測量各孔的吸光值(OD),計算抑制率,得出IC50,用于下一步實驗。
2.紫杉醇對Caski細胞中β-catenin蛋白表達的影響
24孔板孔內(nèi)放入蓋玻片重新培養(yǎng)Caski細胞,對照組未予紫杉醇處理,而實驗組則加入紫杉醇(IC50終濃度6.04nmol/L),溫箱中孵育48h后,β
3、-catenin蛋白表達采用細胞免疫組織化學(xué)法檢測。高倍光鏡下(S-P法╳400)觀察染色結(jié)果,計算陽性率。
3.紫杉醇對Caski細胞中c-myc的mRNA表達的影響
24孔板孔內(nèi)培養(yǎng)Caski細胞,在實驗組中加入紫杉醇溶液終濃度6.04nmol/L,對照組加等體積培養(yǎng)液,溫箱中孕育48小時后,各組細胞c-myc基因表達應(yīng)用qRT-PCR法檢測。
結(jié)果:
1.實驗組和對照組β-catenin蛋白
4、于胞質(zhì)及胞核中均有表達,對照組棕黃色顆粒者更致密,呈團塊狀。實驗組β-catenin蛋白表達陽性率為39.3%,對照組β-catenin蛋白表達陽性率為71.7%。實驗組中陽性率明顯減少(P<0.05)。
2.經(jīng)檢測c-myc的mRNA在實驗組和對照組Caski細胞中均有表達,癌基因c-myc mRNA含量實驗組較對照組明顯下降(P<0.05)。
結(jié)論:
紫杉醇作用Caski細胞后β-catenin蛋白表達
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