2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、研究背景:
  腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)是治療終末期腎臟疾病(endstage renal disease,ESRD)的重要替代治療方法之一。但是,長期暴露于高糖腹膜透析液最終可導(dǎo)致腹膜組織纖維化(peritonealfibrosis,PF),透析效能降低,最終導(dǎo)致超濾衰竭(ultrafiltration faifure,UFF),嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和長期存活率。近期研究發(fā)現(xiàn),上皮細(xì)胞一間充質(zhì)細(xì)

2、胞轉(zhuǎn)分化(epithelial mesenchymal transition,EMT)是腹膜纖維化過程中的觸發(fā)和始動(dòng)因素,它可導(dǎo)致腹膜間皮細(xì)胞失去間皮細(xì)胞的特點(diǎn),向成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化,產(chǎn)生大量細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM),是腹膜功能退化的關(guān)鍵過程。目前認(rèn)為,在眾多調(diào)節(jié)間皮細(xì)胞EMT的細(xì)胞因子和介質(zhì)中,轉(zhuǎn)化生長因子(transforming growth factorβ,TGF-β)是最關(guān)鍵的因素。但是,目前

3、腹膜纖維化的機(jī)制仍未完全闡明,且尚無有效的治療方式。
  Wnt蛋白是一類富含半胱氨酸的分泌型脂化糖蛋白,參與調(diào)控了器官發(fā)育,細(xì)胞分化增殖,細(xì)胞極性以及細(xì)胞遷移。Wnt蛋白通過三條信號(hào)通路發(fā)揮作用,最經(jīng)典的為β-catenin介導(dǎo)的Wnt/β-catenin信號(hào)通路。近年來的研究顯示,Wnt/β-catenin信號(hào)通路的異常活化與許多疾病,如腫瘤、遺傳性疾病和器官纖維化等相關(guān),并已證明其參與EMT的發(fā)生。此外,研究證實(shí)Wnt/β-

4、catenin與TGF-β信號(hào)交互作用,參與介導(dǎo)了TGF-β誘導(dǎo)多種細(xì)胞EMT及纖維性疾病的發(fā)生過程?;谝陨戏治?,我們認(rèn)為,Wnt/β-catenin信號(hào)通路參與調(diào)控腹膜透析腹膜間皮細(xì)胞EMT及腹膜纖維化的過程。為此,本研究開展如下。
  第一章腹透流出液間皮細(xì)胞Wnt/β-catenin通路活性與EMT的關(guān)系研究。
  目的:
  檢測腹膜透析患者腹膜透析流出液細(xì)胞中Wnt/β-catenin信號(hào)通路的表達(dá)及EMT

5、發(fā)生情況,初步探討Wnt/β-catenin信號(hào)通路與腹膜間皮細(xì)胞EMT及腹膜纖維化的關(guān)系
  方法:
  隨機(jī)選取新開管持續(xù)不臥床腹膜透析患者12人,腹透一年以上者12人,分離培養(yǎng)并經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)鑒定透析流出液細(xì)胞。通過Realtime-PCR檢測流出液細(xì)胞Wnt(1,2,3,3a,4,5a,7b,8a,10a),β-catenin,DKK1(Dickkopf1),淋巴樣增強(qiáng)結(jié)合因子1(Lymphoidenhancer-bi

6、ndingfactor1, LEF1),α-肌動(dòng)蛋白(smooth muscleactin-alpha,α-SMA),E-鈣粘蛋白(E-Cadherin),膠原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ,ColⅠ),纖維連接蛋白(Fibronectin,F(xiàn)N),基質(zhì)金屬蛋白酶-7(Matrix Metallo proteinases-7,MMP-7)的表達(dá),Western Blot檢測流出液細(xì)胞β-catenin,E-Cadherin,α-SMA,CO

7、L-Ⅰ的表達(dá)。
  結(jié)果:
  (1)腹透流出液細(xì)胞經(jīng)鑒定為腹膜間皮細(xì)胞,且細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)纖維樣改變。(2)透析一年以上組α-SMA,ColⅠ,F(xiàn)N表達(dá)明顯高于新開管組,E-Cadherin表達(dá)明顯低于新開管組(3)透析一年以上組Wnt1,Wnt5a,Wnt7b,Wnt8a mRNA表達(dá)明顯高于新開管組,且β-catenin mRNA及蛋白表達(dá)明顯高于新開管組(4)透析一年以上組DKK1,LEF1及MMP-7 mRNA表達(dá)高于

8、新開管組。
  結(jié)論:
  隨腹膜透析時(shí)間延長,Wnt/β-catenin信號(hào)通路活性顯著升高,腹膜間皮細(xì)胞發(fā)生EMT改變,提示W(wǎng)nt/β-catenin信號(hào)通路可能與腹膜透析腹膜間皮細(xì)胞EMT及腹膜纖維化相關(guān)。
  第二章 Wnt/β-catenin信號(hào)通路在高糖誘導(dǎo)人腹膜間皮細(xì)胞EMT中的作用。
  目的:
  探討Wnt/β-catenin在高糖誘導(dǎo)人腹膜間皮細(xì)胞EMT中的作用。
  方法:

9、r>  用不同濃度(30,60,90mM)高葡萄糖刺激人腹膜間皮細(xì)胞株(HMrSV5)細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)(0,12,24,48h),通過免疫熒光、realtimePCR及western blot檢測細(xì)胞中E-cadherin、α-SMA、ColⅠ、FN及β-catenin、Wnt1,5a、LEF1的表達(dá);轉(zhuǎn)染DKK1質(zhì)粒,再予60mM高糖刺激,通過細(xì)胞免疫熒光、realtime PCR及western blot檢測HMrSV5細(xì)胞E-cad

10、herin、αt-SMA、ColⅠ、FN及β-catenin、LEF1的表達(dá)變化。
  結(jié)果:
  高糖刺激后,人腹膜間皮細(xì)胞E-cadhefin mRNA及蛋白表達(dá)降低,α-SMA及ColⅠ、FN mRNA及蛋白表達(dá)水平升高;β-catenin、Wnt1,5a、LEF1表達(dá)呈時(shí)間及濃度依賴性降低。與高糖刺激組相比較,過表達(dá)DKK1使β-catenin、LEF1表達(dá)下調(diào),E-cadherin表達(dá)上調(diào),α-SMA及ColⅠ表達(dá)

11、下調(diào);但轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒對(duì)高糖誘導(dǎo)的人腹膜間皮細(xì)胞β-catenin、LEF1、E-cadherin、α-SMA及ColⅠ的表達(dá)變化無明顯影響。
  結(jié)論:
  高糖誘導(dǎo)人腹膜間皮細(xì)胞Wnt/β-catenin異常活化;過表達(dá)DKK1拮抗Wnt/β-catenin信號(hào)抑制高糖誘導(dǎo)人腹膜間皮細(xì)胞EMT。
  第三章 Wnt/β-catenin信號(hào)在TGFβ1誘導(dǎo)人腹膜間皮細(xì)胞EMT中的作用。
  目的:
  探討W

12、nt/β-catenin在TGFβ1誘導(dǎo)的人腹膜間皮細(xì)胞EMT中的作用。
  方法:
  用不同濃度TGFβ1(2.5,5,10ng/ml)刺激HMrSV5細(xì)胞,通過免疫熒光、realtime PCR及western blot檢測細(xì)胞中E-cadherin、α-SMA、ColⅠ及β-catenin、Wnt1,5a、LEF1的表達(dá);轉(zhuǎn)染DKK1質(zhì)粒及陰性對(duì)照空質(zhì)粒,再予TGFβ1刺激,通過細(xì)胞免疫熒光、realtime PCR

13、及western blot檢測HMrSV5細(xì)胞E-cadherin、α-SMA、ColⅠ及β-catenin、LEF1的表達(dá)變化。
  結(jié)果:
  TGFβ1刺激后,人腹膜間皮細(xì)胞E-cadherin mRNA及蛋白表達(dá)水平降低,α-SMA及ColⅠmRNA及蛋白表達(dá)水平升高;β-catenin、Wnt1,5a、LEF1 mRNA表達(dá)呈濃度依賴性升高。與TGFβ1刺激組相比較,過表達(dá)DKK1使β-catenin、LEF1表達(dá)

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