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1、為進一步研究HBV-TR基因在體內(nèi)的表達,以及為該基因在乙型肝炎小動物模型體內(nèi)的抗病毒功能研究和臨床應(yīng)用研究奠定基礎(chǔ),該課題首先構(gòu)建了HBV-TR重組腺病毒載體,在HEK293細胞中大量擴增至一定滴度后感染正常小鼠,然后用免疫組織化學(xué)的方法研究該重組腺病毒在正常小鼠體內(nèi),特別是肝臟的表達狀況及其毒性反應(yīng).該研究使用AdMax Kit D系統(tǒng)完成HBV-TR重組腺病毒載體的構(gòu)建.首先是構(gòu)建穿梭質(zhì)粒(shuttle plasmid),Bam
2、H Ⅰ和HindⅢ雙酶切pcDNA3.1(-)/TR得到TR基因片段,同時用BglⅡ和HindⅢ雙酶切質(zhì)粒載體pDC316,然后用T4 DNA連接酶將TR基因片段插入質(zhì)粒載體pDC316,從而得到穿梭質(zhì)粒pDC316/TR.使用相同的方法構(gòu)建對照組穿梭質(zhì)粒pDC316/TRm、pDC316/hEDN和pDC316/HBc.該課題成功構(gòu)建了乙型肝炎病毒靶向核糖核酸酶基因的重組腺病毒載體AdTR及其對照載體AdTRm、AdhEDN、AdHB
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