豬FUT1和SLA-DQB基因多態(tài)性及抗病育種基礎(chǔ)研究.pdf

1、大腸桿菌F18受體(ETECF18R)相關(guān)基因(FUT1)和SLA-DQB基因是與豬抗病育種相關(guān)的重要候選基因，本研究分析了豬大腸桿菌F18受體(ETECF18R)相關(guān)基因(FUT1)和SLA-DQB基因多態(tài)性及其與生產(chǎn)性能之間的關(guān)系，進(jìn)一步探索了外來豬種與中國地方豬種間FUT1基因和SLA-DQB基因遺傳基礎(chǔ)的差異，重點探討了不同基因型豬F18抗性/易感性的相關(guān)性，旨在建立豬抗F18大腸桿菌病分子育種的可行性方案，主要結(jié)果如下：

2、 (1)采用PCR-RFLP和PCR-SSCP技術(shù)，分別對14個豬種FUT1基因開放閱讀框307bp和857bp位點進(jìn)行檢測，M307位點只有在外來豬種杜洛克、皮特蘭中檢測到AA型純合子，外來豬種中的約克夏、長白豬以及所有的國內(nèi)地方豬種和含有外來豬種血緣成分的豬種均未發(fā)現(xiàn)AA型純合子，國內(nèi)地方豬種大部分個體為GG型純合子，其基因型頻率為0.789-1.000。所有豬種在M857位點均未檢測到AA型純合子，國內(nèi)地方豬種中，除臨高豬有少量

3、AG型個體(基因型頻率為0.290)外，其他豬種均未發(fā)現(xiàn)AG型個體。 (2)選擇M307位點基因型GG的10個個體和AA型的7個個體(該17個個體在M857處既含有AG型，又含GG型)DNA樣本進(jìn)行基因擴(kuò)增、克隆和測序，結(jié)果證實在FUT1基因開放閱讀框M307位點確實存在G/A突變，突變的結(jié)果導(dǎo)致相應(yīng)的氨基酸由蘇氨酸代替了丙氨酸；在M857位點，本研究首次發(fā)現(xiàn)存在C/T突變，突變的結(jié)果導(dǎo)致相應(yīng)的氨基酸由精氨酸變?yōu)樯彼帷?

4、 (3)采用PCR-RFLP技術(shù)，對16個豬種SLA-DQB外顯子2進(jìn)行多態(tài)性檢測，HaeⅢ酶切后共產(chǎn)生11種基因型，共計6種等位基因，其中含有外來豬種血緣成分的豬種、雜交豬種和國內(nèi)地方豬種中A、B和D均為優(yōu)勢等位基因，具有豐富的多態(tài)性；RsaⅠ酶切后共產(chǎn)生10種基因型，共計4種等位基因，其中A和B等位基因在外來豬種、含有外來豬種血緣成分的豬種和國內(nèi)地方豬種中均為優(yōu)勢等位基因。 (4)SLA-DQB基因采用RsaⅠ(酶切位點為G

5、TAC)進(jìn)行酶切時，在其27bp和111bp處同時發(fā)現(xiàn)酶切位點，產(chǎn)生新的基因型DD；采用HaeⅢ(酶切位點為GGCC)進(jìn)行酶切時，在40bp、167bp和171bp處同時發(fā)現(xiàn)酶切位點，產(chǎn)生新的基因型FF。 (5)根據(jù)各豬種FUT1基因M307等位基因頻率，基于Nei氏遺傳距離構(gòu)建NJ和UPGMA系統(tǒng)發(fā)生樹，應(yīng)用自舉檢驗估計系統(tǒng)中結(jié)點的自引導(dǎo)值。由NJ系統(tǒng)發(fā)生樹可見，所有的國內(nèi)地方豬種首先聚為一個大的類群，而含有外來豬種血緣成分的

6、豬種和所有的外來豬種與國內(nèi)地方豬種遺傳距離較遠(yuǎn)。UPGMA系統(tǒng)發(fā)生樹也清楚的顯示，所有的國內(nèi)地方豬種首先聚為一個大的類群，而含有外來豬種血緣成分的豬種和所有的外來豬種也聚為一個大的類群，兩大類群間遺傳距離較遠(yuǎn)。 (6)根據(jù)各豬種SLA-DQB基因HaeⅢ酶切結(jié)果中各等位基因頻率，基于Nei氏遺傳距離運用NJ法和UPGMA法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹，兩種系統(tǒng)發(fā)生樹的聚類結(jié)果基本相同，臨高豬、樂平花豬、二花臉、楓涇豬、皮特蘭、修水杭豬、蘇太豬

7、和藏豬等8個豬種始終聚為一個大的類群，地方豬種、含有外來豬種血緣成分的豬種和外來豬種并沒有分為不同類群。 (7)蘇太豬FUT1基因M307位點各基因型的生產(chǎn)性能比較表明，AG基因型的個體平均生產(chǎn)性能高于GG基因型的個體，AG基因型的個體1胎斷奶窩重、2胎斷奶窩重、3胎總產(chǎn)仔數(shù)和6胎斷奶窩重均顯著高于GG基因型的個體。 (8)蘇太豬SLA-DQB不同基因型的生產(chǎn)性能比較表明，HaeⅢ酶切的3種基因型BB、BD和DD分別與R

8、saⅠ酶切的3種基因型AA、AB、BB相對應(yīng)，HaeⅢ酶切的3種基因型和RsaⅠ酶切的3種基因型均與2胎斷奶成活率顯著相關(guān)，與3胎總產(chǎn)仔數(shù)、產(chǎn)活仔數(shù)、初生窩重、斷奶仔豬數(shù)和斷奶窩重顯著相關(guān)，與6胎總產(chǎn)仔數(shù)、斷奶仔豬數(shù)和斷奶窩重也顯著相關(guān)。其中DD和BB基因型的個體上述生產(chǎn)性能顯著高于BB和AA基因型的個體，也高于BD和AB基因型的個體，但差異不顯著。 (9)仔豬小腸上皮細(xì)胞的黏附試驗結(jié)果顯示，30～35日齡M307GG基因型和M

9、307AG基因型斷奶仔豬的小腸上皮細(xì)胞均能與表達(dá)F18ab菌毛標(biāo)準(zhǔn)菌株107/86、誘導(dǎo)表達(dá)F18ac菌毛的重組大腸桿菌rE.coli1534及誘導(dǎo)菌體表面展示表達(dá)F18黏附亞單位FedF的重組大腸桿菌pnirBMisL-fedF發(fā)生黏附作用，而同日齡M307AA基因型斷奶仔豬的小腸上皮細(xì)胞均不能與上述三株大腸桿菌發(fā)生黏附作用。3日齡易感仔豬小腸上皮細(xì)胞也不能黏附上述三株大腸桿菌，但可以很好地黏附表達(dá)于987P菌毛的大腸桿菌。

10、(10)仔豬小腸上皮細(xì)胞的黏附抑制試驗中，產(chǎn)F18ab菌毛標(biāo)準(zhǔn)菌株107/86、誘導(dǎo)表達(dá)F18ac菌毛的重組大腸桿菌rE.coli1534及誘導(dǎo)菌體表面展示表達(dá)F18abFedF亞單位的重組大腸桿菌pnirBMisL-fedF與相應(yīng)的兔抗F18ab菌毛血清作用后，對30～35日齡M307GG基因型和M307AG基因型斷奶仔豬的小腸上皮細(xì)胞黏附能力幾乎喪失。 (11)以本研究的實驗方法和結(jié)果為指導(dǎo)，結(jié)合其他相關(guān)資料，以蘇太豬為例，